Investigation of apolipoproteins transfer quantitative method and their mechanism
Project/Area Number |
22K07466
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 52010:General internal medicine-related
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Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
Principal Investigator |
大川 龍之介 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 教授 (50420203)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
亀田 貴寛 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教 (80758558)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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Keywords | アポリポタンパク転送 / 中性脂肪代謝 / リポタンパクリパーゼ / 高比重リポタンパク / 超低比重リポタンパク / リポタンパク / アポリポタンパク / 転送 / 脂質代謝 |
Outline of Research at the Start |
アポリポタンパク(apo)は,高比重リポタンパクや超低比重リポタンパク,低比重リポタンパクなどのリポタンパクに存在する様々なタンパクの総称であり,脂質代謝に重要な役割を担う.循環血液中,各リポタンパク間でapoは双方向に転送されるが,一部のapoに関して,同種においても局在するリポタンパクによって脂質代謝に関する真逆の生理作用を発揮する.したがって,本研究ではapoの転送量の評価方法を開発,その転送の程度や要因(リポタンパクの脂質組成,修飾など),転送の程度がリポタンパクの機能に与える影響を調べ,現在の脂質の定量検査に加えて,より早期の脂質代謝異常の予測や原因究明を目指していく.
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Outline of Annual Research Achievements |
1.リポタンパク間のアポリポタンパク転送の定量法の確立 高比重リポタンパク(HDL)とビオチン標識した超低比重リポタンパク(VLDL)とを生体内の平均的なタンパク濃度比で混合し,インキュベーションを行い,その後,超遠心によって再びHDLを分離した.分離したHDL中に転送されたアポリポタンパクをウエスタンブロッティング(ストレプトアビジンで視覚化)および液体クロマトグラフィー質量分析(LC-MS/MS)で分析したところ,われわれが既に明らかにしたアポリポタンパクC-II,C-III,Eに加えて,まだ不確定であったアポリポタンパクC-IVがVLDL濃度依存的にHDLに転送されていることを確認した.転送量を定量するために,ELISA法を用いた転送量の評価法を構築すべく,まず初めにアポリポタンパクC-IIを対象に試みた.その結果,HDLタンパク濃度あたりで1.0×10^-5 mg/mL程度まで高感度に定量することが可能となった. 2.VLDL中の中性脂肪の被水解率の評価 アポリポタンパク転送後の各種脂質代謝に与える影響を確認するため,はじめにVLDL中の中性脂肪の被水解率評価法の確立を目指した.血漿を対象とした場合とVLDLを対象とした場合では,リポタンパクリパーゼに対するVLDL中の中性脂肪の水解の速度は異なり,その要因として,血漿中に存在する他のリポタンパクがリポタンパクリパーゼのVLDLへのアクセスを抑制していることが示唆された.この現象を確認するために,各種リポタンパク分画,アルブミンやグロブリンを主に含むリポタンパク以外の血漿タンパク成分を含む分画を用いて検証した.その結果,HDLが最もVLDL中の中性脂肪に対するリポタンパクリパーゼの作用に対する抑制効果が強いことが明らかになった.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
期待通り,ビオチンを用いて,アポリポタンパク転送量の測定が可能となった.超低比重リポタンパク中の中性脂肪代謝に関しては,高比重リポタンパクが加水分解を抑制するという予想外の結果となった.これは生体内の反応を模倣しているわけではなく,試験管内の評価の上での現象だと考えられ,正確な被水解率の検討には,さらなる条件検討が必要であり新たな課題となっている.
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Strategy for Future Research Activity |
アポリポタンパク転送量の評価は,構築したELISA法で可能となったため,今後は本法の性能評価を実施する必要がある.また,アポリポタンパクC-IIだけでなく,他のリポタンパクの定量法の確立も行う.それぞれのアポリポタンパクの定量法が確立した後,様々なリポタンパクを用いて,実際にそれぞれの転送量を確認する.また,同時に検討している超低比重リポタンパク中の中性脂肪被水解率を評価法を今後確立することで,この二つの評価法を組み合わせて,中性脂肪代謝に重要とされるアポリポタンパクの転送が超低比重リポタンパク中の中性脂肪の水解にどのように影響を与えるかが調査可能となると考えている.次年度は,計画していたリポタンパクと各種細胞との相互作用にも着手したい.
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Report
(1 results)
Research Products
(40 results)