| Project/Area Number |
22K07473
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Section | 一般 |
|---|
| Review Section |
Basic Section 52010:General internal medicine-related
|
|---|
| Research Institution | Kagawa University |
|---|
Principal Investigator |
藤田 浩二 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (50749421)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
|
| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
|
|---|
| Keywords | プロテオーム解析 / Microarray / 耐性 / 肝細胞癌 / 薬剤耐性 / miRNA |
|---|
| Outline of Research at the Start |
申請者は国立大学医学部附属病院消化器内科にて，肝臓専門医として肝細胞がんの症例
の診療に従事している．受容体チロシンキナーゼ阻害薬の登場により，肝細胞がん例の生存率は改善したが，それでも受容体チロシンキナーゼ阻害薬にて根治する肝細胞癌例は，全体
の 1-2%に過ぎない．申請者の勤務する診療科においては，レンバチニブで根治した症例は，現在までのところ，わずか一例しかない．本研究においては，タンパク質をコードしないmiRNAという分子に着目し，薬剤耐性のメカニズムに作用するmiRNAを同定し，治療への応用の基礎的データを提示することを目的としています．
|
| Outline of Annual Research Achievements |
1) カボザンチニブがレンバチニブ耐性肝がん細胞に対して有効であることを動物実験で検証した．レンバチニブ耐性肝がん細胞株をマウスの皮下に移植し，カボザンチニブをマウスに経口投与した．その結果，カボザンチニブを投与した群においては，対照群に比べて，皮下に移植したレンバチニブ耐性肝がん細胞の成長が抑制された．2) 次に，カボザンチニブの薬効に関連するタンパク質及びmicroRNAの同定を試みた．マウスの皮下から腫瘍を取り出して，腫瘍に含まれるたんぱく質の発現をプロテオーム解析にて網羅的に解析した．また，タンパク質の発現を制御する分子であるmicroRNAについても，microarrayを用いて網羅的に解析した．その結果，カボザンチニブ投与群と対照群の比較において，統計学的に有意に発現が異なるタンパク質48分子とmicroRNA 10分子をそれぞれ同定した．同定されたタンパク質の発現が，同じく同定されたmicroRNAによって制御されている可能性について，microRNAのデータベース(miRDB)を用いて検索した．その結果，同定されたmicroRNAとタンパク質の間には，直接的な反応(microRNAがmessanger RNAの3'末に結合すること)は無いものと予測された．3) カボザンチニブの薬効に関連するmicroRNAについて，腫瘍の増殖を抑制する作用を検証した．同定されたmicroRNAをレンバチニブ耐性肝がん細胞に取り込ませた(Lipofectamineによるtransfection)．また逆に，同定されたmicroRNAの阻害物質 (miRNA inhibitor)を同様にレンバチニブ耐性肝がん細胞に取り込ませた．その結果，レンバチニブ耐性肝がん細胞において発現の増加していたmicroRNAは，腫瘍の増殖を抑制しないことが分かった．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスを用いた動物実験を成功させた．マウスの皮下から回収した腫瘍を用いて，タンパク質とmicroRNAをそれぞれ網羅的に解析した．microRNAのデータベースで検索した結果，抽出されたmicroRNAは，同じく抽出されたタンパク質のmesssanger RNAの3'末には結合しないことが予測された．そのため，microRNAとタンパク質のパスウェイ解析は省略した．
|
| Strategy for Future Research Activity |
プロテオーム解析で抽出されたタンパク質に腫瘍増殖を抑制もしくは促進させる効果があるかどうか，siRNAを用いて当該タンパク質をノックダウンさせる方法で検証する．
|
