| Project/Area Number |
22K07940
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52050:Embryonic medicine and pediatrics-related
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
宮地 充 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40584983)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90381938)
菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (40453104)
吉田 秀樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10643546)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 横紋筋肉腫 / PLAGL1 / FOXO1 / 融合遺伝子 |
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| Outline of Research at the Start |
小児で最も頻度の高い軟部悪性腫瘍である横紋筋肉腫は、組織型として胞巣型と胎児型に大別される。胞巣型では、PAX3-FOXO1、PAX7-FOXO1の二つの融合遺伝子が同定されており、腫瘍化に寄与している。今回、我々は胞巣型の症例で認められた染色体転座を解析し、新規融合遺伝子PLAGL1-FOXO1を同定した。レトロウイルス発現系を用いて、本融合遺伝子の機能解析を行い、特にPAX3-FOXO1との差異、共通点について検討し、依然予後の極めて不良なPAX3-FOXO1陽性横紋筋肉腫の病態、発生における分子機構を解明する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、胞巣型横紋筋肉腫症例で認めたPLAGL1-FOXO1融合遺伝子の機能解析を行い、難治性の胞巣型横紋筋肉腫で認めるPAX3-FOXO1融合遺伝子との差異を明らかにすることで、横紋筋肉腫の病態を解明することを目的とする。
令和5年度は、PLAGL1-FOXO1、PAX3-FOXO1融合遺伝子をサブクローニングしたMSCVベクターを用いて、マウス筋芽細胞株であるC2C12細胞株やマウス線維芽細胞株である3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1、PAX3-FOXO1安定発現細胞株を作成した。作成された細胞株において、mRNAレベルでPAX3-FOXO1、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の発現を確認した。タンパクレベルでの発現について、現在確認中である。
3T3細胞株の安定発現細胞株を用いた機能解析実験では、細胞増殖は、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子安定発現細胞株が、PAX3-FOXO1融合遺伝子安定発現細胞株に比して、緩やかな増殖を示し、融合遺伝子を導入していない細胞株に比して増殖は亢進していた。C2C12細胞株の安定発現細胞株を用いたコロニーフォーメーションアッセイでも、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子安定発現細胞株が、PAX3-FOXO1融合遺伝子安定発現細胞株に比して、形成コロニーが少なく、融合遺伝子を導入していない細胞株に比して形成コロニーの増加を認めた。
以上より、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子は増殖能や足場非依存性増殖能の亢進を示すが、PAX3-FOXO1融合遺伝子に比べると、その増殖能が緩やかであることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
安定発現細胞株の作成、機能解析を進めているが、安定発現細胞株のタンパクレベルでの遺伝子発現を確認中であり、令和5年度中の実施計画よりやや遅延しているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和6年度は安定発現細胞株の融合遺伝子タンパクの発現を確認し、PLAGL1-FOXO1の種々の遺伝子発現に及ぼす影響、分化に及ぼす影響、in vivoでの増殖に及ぼす影響を検討していく。
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