Characterization of PLAGL1-FOXO1 fusion gene in alveolar rhabdomyosarcoma
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22K07940
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52050:Embryonic medicine and pediatrics-related
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
宮地 充 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40584983)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90381938)
菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (40453104)
吉田 秀樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10643546)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 横紋筋肉腫 / PLAGL1 / FOXO1 / 融合遺伝子 |
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| Outline of Research at the Start |
小児で最も頻度の高い軟部悪性腫瘍である横紋筋肉腫は、組織型として胞巣型と胎児型に大別される。胞巣型では、PAX3-FOXO1、PAX7-FOXO1の二つの融合遺伝子が同定されており、腫瘍化に寄与している。今回、我々は胞巣型の症例で認められた染色体転座を解析し、新規融合遺伝子PLAGL1-FOXO1を同定した。レトロウイルス発現系を用いて、本融合遺伝子の機能解析を行い、特にPAX3-FOXO1との差異、共通点について検討し、依然予後の極めて不良なPAX3-FOXO1陽性横紋筋肉腫の病態、発生における分子機構を解明する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和4年度は、まず、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長をPCR増幅し、クローニングした。クローニングされたPLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長の配列が正しい配列であることをSangerシーケンスにて確認した。次にPLAGL1-FOXO1融合遺伝子をGFPベクターにサブクローニングし、293細胞株にトランスフェクションし、細胞内局在を確認した。蛍光顕微鏡で観察したところ、コントロールベクターを導入した細胞では、細胞全体に蛍光を認めたのに対して、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子をサブクローニングしたGFPベクターを導入した細胞では蛍光が核内に局在していることが確認された。PLAGL1-FOXO1融合遺伝子は、PLAGL1遺伝子のDNA結合ドメインが保持されていることから、核内の局在が予想され、予想と合致した結果であった。FLAGベクターにもPLAGL1-FOXO1融合遺伝子をサブクローニングし、293細胞株に強制発現させたが、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の塩基長が長いためか、トランスフェクション効率が悪く、ウエスタンブロッティング法によるPLAGL1-FOXO1タンパクの同定には至らなかった。マウス筋芽細胞株であるC2C12細胞株やマウス線維芽細胞株である3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成するため、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子をMSCVベクターにサブクローニングし、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長の配列が正しい配列であることをSangerシーケンスにて確認した。令和5年度以降、このベクターを用いて、C2C12細胞株や3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成し、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の機能解析を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
PALGL1-FOXO1融合遺伝子のクローニング、ベクターへのサブクローニングに時間を要し、やや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和5年度以降、MSCVベクターを用いて、C2C12細胞株や3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成し、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の機能解析を行う。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)
