Project/Area Number |
22K07946
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 52050:Embryonic medicine and pediatrics-related
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Research Institution | Jikei University School of Medicine |
Principal Investigator |
大石 公彦 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (20287212)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡野 ジェイムス洋尚 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (90338020)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥520,000 (Direct Cost: ¥400,000、Indirect Cost: ¥120,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
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Keywords | 患者由来iPS細胞 / Rbm10-KOマウス / TARP症候群 / RBM10 / iPS細胞由来神経細胞 / 精神発達遅滞 / マウスモデル |
Outline of Research at the Start |
TARP症候群は重篤な神経学的症状(知的障害・精神発達遅滞)と多発奇形を呈し、RNA結合タンパク質をコードするRBM10遺伝子の機能喪失変異により生じる早期致死性の遺伝性疾患である。本症候群は報告例が少ない希少疾患のため、RBM10異常と発症機序との関連性は未解明である。本研究は、TARP症候群を引き起こすミスセンス変異型iPS細胞、および機能喪失型iPS細胞を作成し、形態学的・生理学的・分子遺伝学的解析を用いた複合的な手法により神経学的症状の発症の分子機序を解明する。さらに、Rbm10-ノックアウトマウスの行動と脳発生過程の解析により、TARP症候群の脳精神機能と形態異常を検証する。
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Outline of Annual Research Achievements |
2022年度は、RBM10のミスセンス変異をもつ患者のリクルートに成功し血液よりiPS細胞樹立に向けての培養作業を開始した。その後の神経細胞分化のプロトコールも確立させている段階である。RBM10の遺伝子異常をもつ患者は世界で極めて少数であり、患者を集めることが難しい。今回リクルートできた患者も米国在住であり帰国時に合わせた血液サンプルの採取であったため、実験の開始が遅れてしまったが、血液から単離したリンパ球培養は順調に進んでおり、今後新たな機器を用いてリプログラミング因子の導入と神経細胞分化を行う。 Rbm10のノックアウトマウスは既に購入しコロニーの増殖に成功している。しかしマウスの導入時、販売先の手違いにより成体ノックアウトマウスがいないことが判明し、導入時期が遅れることになった。現在Rbm10-KOの仔マウスの外表奇形の評価、脳組織の組織学的解析を開始している。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RBM10の遺伝子異常をもつ患者は世界で極めて少数であり、国内で患者を集めることが難しい。今回リクルートできた患者も米国在住であり帰国時に合わせて血液サンプルの採取を行なったため、実験の開始が遅れてしまった。またRbm10-KOマウスの導入時、販売先の手違いにより成体ノックアウトマウスがいないことが判明し、凍結保存精子からの作成となったため導入時期が遅れた。
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Strategy for Future Research Activity |
2023年度以降は患者由来のiPS細胞の樹立と神経細胞分化を行い、細胞オルガネラやシナプス形成の組織学的解析を進める。同時に各種オミクス解析(RNA-seq, CLIP-seq等)により、野生型と異なる遺伝子発現量の変化やRBM10の下流遺伝子のスプライシングパターンの変化を解析する。 Rbm10-KOマウスは脳組織の構造的な時系列変化を観察するとともに、詳細な行動解析を進め、生理学的観点を合わせたRBM10機能喪失に特異的な異常を同定する。
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