末梢血リンパ球でのHBOCの診断、発がん予防、予測システムの開発

Research Project

Project/Area Number	22K08700
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 55010:General surgery and pediatric surgery-related
Research Institution	Tohoku Medical and Pharmaceutical University
Principal Investigator	渡部剛東北医科薬科大学, 医学部, 准教授 (70451573)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	千葉奈津子東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (50361192) 高井淳東北医科薬科大学, 医学部, 助教 (90813890)
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2025-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000) Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000) Fiscal Year 2023: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000) Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Keywords	BRCA / HBOC / 中心体 / FACS / carcinogenesis / estrogen
Outline of Research at the Start	BRCA1/2とも中心体制御に強く関連していることから、BRCAの機能予測を中心体数で評価できるか検討する。具体的にはBRCA1 wt/mtマウスを用いて各種発がんを促進する介入を加えながら、定期的な採血にて末梢血リンパ球の中心体数の増加をフローサイトメトリーや免疫染色で検出すし、実際の発癌とどの程度相関するかを検討する。将来的にHBOCの発がんリスクを経時的に評価するシステムの確立を目指す。また発癌をきたしたHBOCマウスの各臓器をTissue Bankとして保存し、今後の乳腺・卵巣（卵管）特異的発癌の詳細な研究につなげる。
Outline of Annual Research Achievements	HBOCでは、個々のBRCA変異に対し経時的な発癌リスクを予測するBRCA機能評価法の開発が望まれる。我々はBRCA1/2の中心体制御機能に着目し、蛍光免疫染色を用いてHBOC乳癌症例の乳癌組織内（主にBRCA両アレルの機能不全）の中心体数が、約4倍に増加していることを示した（Cancer Sci. 2018）。BRCA片アレル機能不全があるHBOC末梢血でも、段階的なBRCA機能不全を、中心体数の変化で検出できないかと考えこの研究を行った。 BRCA1ヘテロKOマウス（BRCA１+/-）とBRCA１ｗｔ（BRCA１+/+）での全血採血(約１ml)でBRCA1ヘテロKOマウスで有意にγ-tubulin(中心体のメインタンパク質）の増加をFACS、蛍光顕微鏡で確認した。また照射することによりBRCA1ヘテロKOマウス（BRCA１+/-）でのみ中心対数が増加した。 scale downしたマウス尾静脈採血（150ul)でも同様の結果を確認することができ、経時的な中心体の変化をモニターすることが可能となった。しかしBRCA１ヘテロKOマウスの自然発がんはほどんど見られず、照射、食餌などの介入も加えてもほとんど発がんは見られなかった。発がんをきたすような更なる介入を追加しているが、今後別のBRCAマウスに変更することも検討している。また微量な採血でも中心体の評価が可能であることが分かったため、当院倫理委員会に申請しBRCA遺伝子検査を受けた乳がん患者を対象に1ml余分に採血し、同様にFACSで中心体評価をする研究が承認された。現在リクルートし並行して検討を行っている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason BRCA変異マウスの発がんがほとんどなく、各種介入（照射、食餌）を加えても発がんが見られていない。今後マウスの変更も検討している。
Strategy for Future Research Activity	人に対する1ml採血での中心体評価が承認されているため、引き続き症例を集積し検討する。ＢＲＣＡ変異マウスの発がんに関しては、現在のマウスではほとんど見られないため、発がん頻度の高い報告がなされているマウスを入手するように検討している。