| Project/Area Number |
22K08809
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
勝田 将裕 和歌山県立医科大学, 医学部, 非常勤講師 (50464673)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北畑 裕司 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (00535338)
宮本 篤 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (00756570)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 学長特命教員(特別顧問) (20191190)
水本 有紀 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (60596980)
宮澤 基樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (90549734)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | がんワクチン / 樹状細胞 / XCL1 / XCR1 |
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| Outline of Research at the Start |
ケモカイン受容体XCR1を発現する樹状細胞サブセット（XCR1+ DC）が、細胞傷害性T細胞（CTL）応答を強く誘導することに着目し、XCR1リガンドであるXCL1の遺伝子導入不活化腫瘍細胞を新規がんワクチンとする開発に着手した。産生されるXCL1により生体内でXCR1+ DCが選択的に腫瘍細胞に遊走し貪食することで、複数のエピトープに対するCTLを効率的に誘導することであるが、さらなる効果増強にはワクチンが産生するXCL1の構造的な不安定性とXCR1+ DC走化活性の改善が課題である。本研究では、これらの課題を克服する改変型のXCL1を遺伝子導入した不活化腫瘍細胞ワクチンを新規に開発する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は改変型のXCL1を遺伝子導入することで、野生型のXCL1に比べてXCR1+ DCの走化性が亢進し、より効率的な抗原提示に基づく多様なCTLの誘導、ひいては、強力な抗腫瘍効果を誘導する新規ワクチンのコンセプトを確立することである。本年度は、改変型XCL1腫瘍細胞ワクチンを作製した。プラスミドベクターpcDNA3を用い、BglIIでプラスミドを切断・直線化した後に、Pan02へlipofection（L ipofectamine3000）し、NeomycinによるDrug selectionを施行。Limiting dilutionによりクローンをpick upし、Real time PCR/ELISAにて改変型XCL1産性能を確認した。さらに、産生する改変型/野生型XCL1によるXCR1+ DCの遊走能を比較し、遊走能の更新を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画よりやや遅れは見られるが、概ね本年度の実施予定の成果は得られており、次年度の研究計画に着手可能なため、概ね順調に進展していると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、Pan02、野生型/改変型XCL1産生Pan02をC57BL/6 mice にinoculationし、生着能・増殖能 を比較する。さらに、Pan02、野生型/改変型XCL1産生Pan02をそれぞれ放射線処理後、in v itro overnight cultureし、7AADとAnnexinVのFACSでアポトーシス細胞の割合を確認する。さらに、野生型/改変型Pan02-XCL1、Pan02でC57BL/6 mice にinoculationし、マウス脾臓CD8+T細胞で抗原に対するintracellular IFN-γを解析する予定である。なお、XCR1+ DCはToll-like recept or3（TLR3）を特異的に発現しているため、adjuvant poly（I:C）併用時についても同様に解析する計画としている。また、Pan02接種後７日目の投与で腫瘍縮小効果を経時的に解析する。各群vaccination後１週間でPan02を接種した場合の腫瘍増殖抑制効果についても検討する。ラジオアイソトープを用いた in vitroでの抗腫瘍効果の解析（Cr release assay）も行う。
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