| Project/Area Number |
22K08813
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Section | 一般 |
|---|
| Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
|
|---|
| Research Institution | Hokkaido University |
|---|
Principal Investigator |
中西 喜嗣 北海道大学, 大学病院, 助教 (40447058)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平野 聡 北海道大学, 医学研究院, 教授 (50322813)
土川 貴裕 北海道大学, 大学病院, 講師 (50507572)
佐々木 勝則 北海道大学, 医学研究院, 学術研究員 (60336394)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
|
| Budget Amount *help |
¥3,510,000 (Direct Cost: ¥2,700,000、Indirect Cost: ¥810,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
|
|---|
| Keywords | ケモカイン / 胆道癌 / 上皮間葉転換 / 癌関連微小環境 |
|---|
| Outline of Research at the Start |
本研究は、胆道癌に対して、1）治療ターゲットとなりうるChemokine receptor (CR)、ならびに 2）Biomarker としての血中Chemokineの同定、を目的とする。
・ 胆道癌細胞株のCRの発現亢進を確認し、リガンド刺激による悪性度関連機能変化(浸潤/遊走能など)を明らかにする。
・腫瘍進行へ関与が示唆されたCR陽性胆道癌細胞株を移植したマウスに対するCR抗体投与による腫瘍進展制御能を示す。
・胆道癌臨床検体におけるCR発現強度による臨床病理学的因子ならびにに術後予後との比較、血清中のchemokineを測定し、新規biomarkerとしての候補を示す。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
１）細胞株使用実験：ケモカインレセプター CXCR7を発現していた細胞株においてPCR, western blotで発現を確認し、CXCR7のリガンドであるCXCL12 を添加したmigration assay, invasion assayにより、CXCR7が発現していた細胞株の遊走能、浸潤能の上昇を確認した。また、特にCXCR7の発現が強かった一種の細胞株について、CXCR12の中和抗体を添加したmigrationならびにinvasion assayでは、中和抗体を添加した細胞でmigration, invasion がともに抑制されることが判明した。加えて、中和抗体により、当該細胞株においてRt-qPCRでE-cadherinの発現低下を認めた。しかし、ケモカインは複数種のレセプターと結合するため、遊走能上昇がCXCR7とは別のレセプターによる活性の可能性がある。よって、CXCR7の活性をなくした細胞株の検討が必要を考え、SiRNAを導入して、同様の実験を行い、比較検討することとなった。しかし、SiRNAの導入に苦慮している段階である。
２）病理組織検体使用実験：肝門部領域胆管癌切除検体においてCXCR7染色を行い、染色強度を三段階に群分けしたところ、免疫染色強度が強くなるにつれ、予後が不良であったことも示された。この検討も、再現性の確認のために、複数の観察者による検討を行う予定である。
３）遺伝子解析：当科切除標本から摘出された凍結検体約50例にてRNA sequenceを行い、DEG解析でCXCR7発現によって2群間に分類し、GESA解析で腫瘍関連のpathwayを確認したところ、CXCR7強陽性群でEMT pathwayのup-regulationされていたことが判明した。
４）研究計画の遅れについて：以上にて、現象の再現性を確認するための実験がおこれている。一方で、マウスを使用した動物実験、患者血清を使用したケモカイン濃度の測定などは、研究費の枯渇のため中止の見通しとなっている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
現象の再現性を確認するための実験がおこれている段階である。
一方で、マウスを使用した動物実験、患者血清を使用したケモカイン濃度の測定などは、研究費の枯渇のため中止の見通しとなっている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
細胞株の実験、ならびに臨床検体における免疫染色による生存解析の再現性に関する検討を行いたいと考えている。
|
