Project/Area Number |
22K08900
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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Research Institution | Wakayama Medical University |
Principal Investigator |
速水 晋也 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (00468290)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上野 昌樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (90405465)
宮本 篤 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (00756570)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 学長特命教員(特別顧問) (20191190)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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Keywords | 肝内胆管癌 / SMYD2 / メチル化 / オルガノイド / CRISPR/Cas9 / メチル基転移酵素 |
Outline of Research at the Start |
肝内胆管癌は予後不良であり、リンパ節転移は強い予後不良因子だが、診断に用いられている現代のモダリティでは限界がある。本研究では第一に、肝内胆管癌転移リンパ節で高発現していたメチル化酵素SMYD2(SET and MYND domain containing 2)による転移メカニズムを、胆管癌オルガノイドを用いて明らかにする。第二にSMYD2をターゲットとしてcirculating cell-free tumor DNA(ctDNA)の発現をモニタリングし、肝内胆管癌リンパ節転移の非侵襲的検査方法を開発する。これにより、適切な手術適応決定・術前/術後化学療法の最適な使用につながる。
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Outline of Annual Research Achievements |
i) 胆管癌オルガノイドの樹立 がんオルガノイド「F-PDO」の胆管癌由来RBIL001-2 (F_PDO_000012) を用いて、F-PDOプロトコールに則り、専用の培養液Cancer Cell Expansion Media plus(032-25745, 富士フイルム和光純薬)にて継代、3D立体構造を確認した。 ii) オルガノイドSMYD2発現解析-免疫化学染色 樹立培養したRBIL001-2におけるSMYD2発現解析として免疫化学染色を行った。抗SMYD2抗体(mouse monoclonal, sc-393827; Santa Cruz Biotechnology)および二次抗体Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 594; ab150116, abcam)を使用、当大学に設置されている 共焦点レーザー走査型顕微鏡(ZEISS Confocal Laser Scanning Microscope Model LSM780)にて観察した。 iii) SMYD2抑制系実験システムの構築:CRISPR/Cas9によるSMYD2抑制系の構築 オルガノイドにおけるSMYD2抑制系として、CRISPR/Cas9遺伝子改変技術を使用した。Manufacturers’ protocolに則り、Lipofectamine 3000 (Thermo Fisher Scientific)によるリポフェクタミン法でSMYD2 CRISPRプラスミド(h)(sc-403129; Santa Cruz Biotechnology)を導入した。免疫化学染色にてSMYD2の蛍光低下ないし消失を確認した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定・計画通り研究を遂行できている。
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Strategy for Future Research Activity |
当初の計画書通り研究を進める。
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