| Project/Area Number |
22K09184
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55060:Emergency medicine-related
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
田中 健之 長崎大学, 病院(医学系), 講師 (30432967)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中川 慎介 福岡大学, 薬学部, 准教授 (10404211)
諸藤 陽一 長崎大学, 病院(医学系), 准教授 (40437869)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
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| Keywords | ARDS / 血管内皮細胞 / 血管透過性亢進 / 敗血症性ショック / ROCK / セロトニン |
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| Outline of Research at the Start |
急性呼吸窮迫症候群(ARDS)の主座病変は細胞間接着因子破綻による血管内皮細胞バリア破綻（血管透過性亢進）だが、それを引き起こす分子基盤は依然未解明で、根本的な治療法はない。肺特異的疑似血管モデルを用いたin vitro実験で、セロトニン（5-HT)による細胞透過の亢進、5-HT拮抗やROCK阻害による細胞透過性亢進の減弱効果を確認する。in vivoの系でも同様に5-HT/ROCK阻害の効果を確認する。in vitro/in vivo両者の解析結果を合わせセロトニン/ROCK活性の血管透過性亢進機序への確固たる関与を評価する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題の概要は、急性呼吸窮迫症候群（ARDS）の主座病変である細胞間接着因子破綻による血管内皮細胞バリア破綻（血管透過性亢進）を引き起こす分子基盤を解析解明することである。研究分担者の諸藤、中川が開発したBBB（脳血管関門バリア）のvitroモデルキットを基盤に、肺由来細胞を使用して肺に特異的な血管内皮細胞疑似血管壁モデルを構築して、そのモデルの確立と安定性の検証、その後、炎症下でのセロトニンやROCK活性の関与を検証することが主目的である。2023,2024年度にはラット肺微小血管内皮細胞とそれを立体的な構造で裏打ちするためにラット脳ペリサイトを用いてトランスウェルにて肺の血管内皮微小環境を再現する実験を実行中である。数回の検証実験にて経内皮電気抵抗 (TEER)を測定し、TEER値が予想よりも低く、既報研究にもあるように肺内皮細胞は他の血管内皮細胞よりもタイトジャンクションが緊密ではなく、TEER値が妥当な値の可能性が高いと考察しているが、追加の再現性をみてからの判断が必要である。この検証でモデルの再現性と安定性が確認できれば炎症刺激実験に進む予定である。研究テーマの派生で議論を開始していた薬剤部との共同研究のトランスウェル実験のひな型のBBBモデルキットを用いた抗菌薬の髄液移行評価のvitroモデルでの検証に関しては、CEZ,CMZ,CTRX,VCM,DAPの測定系が確立されたため、抗菌薬透過性実験を開始した。DAPの濃度結果にばらつきがあり、master mixの濃度調整、培養時間などの調整を検証中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ラット肺微小血管内皮細胞とラット脳ペリサイトの共培養の安定性の条件設定に時間を要している。薬剤部との共同研究の案件に関しては、抗菌薬濃度測定に使用していた質量分析器が故障してその修理が必要となるインシデントが発生して実験計画が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
肺内皮細胞とペリサイトの共培養実験に関してはTEER値の再現性の確認を進め、既往同様の低めの値の検討が確認できれば、確実な事実の検証として、TEERよりもEvans Blue-Albumin(EBA)やFITC-Dextranなどの大きめの分子の透過性で評価する方法も早めに検討していく。抗菌薬髄液移行細胞実験に関しては、測定機器の修理が完了すれば再度計画にそって進めることができると考えている。
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