| Project/Area Number |
22K09634
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
金野 陽輔 北海道大学, 大学病院, 助教 (10572703)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
董 培新 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (50602504)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 子宮頸癌 / 環状RNA / 頸癌 / circular RNA / マーカー |
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| Outline of Research at the Start |
子宮頸癌(頸癌)の診断に汎用されるSCC抗原にいくつかの課題があるが、頸癌の早期診断に有効なマーカーは確立していない。本研究では、頸癌の早期診断を可能にする環状RNA候補を、次世代シーケンサーにて、網羅的に探索する。同定した環状RNA候補の発現と組織型、進行期、予後、治療に対する抵抗性などとの相関を調べて、末梢循環環状RNAの臨床的意義を探る。また、これらの環状RNAの導入による頸癌細胞悪性度の変化を検討する。更に、環状RNAに吸着するmicroRNA、またmicroRNAの標的遺伝子を同定する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの研究で、悪性度の高い頸癌細胞株Hela及びSiHaで特に上昇し、また早期子宮頸癌患者やCIN患者組織で有意に上昇していた環状RNAであるhsacirc_
0003572及びhsa-circ_00018289について研究を行った。
計画通りに、Back splicing junctionを挟むように環状RNA特異的プライマーを設計し、環状RNA候補であるhsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の頸癌細胞での発現の変動を定量PCR法で確認した。正常細胞株に比較し、頸癌細胞株（Hela、SiHa及びCaSki）でのhsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の高発現を確認した。続いて、頸癌細胞株（Hela、SiHa及びCaSki）を用い、hsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の発現を特異的に抑制し、また過剰発現により発現変動させ、細胞の増殖アッセイ、運動アッセイ、浸潤能アッセイなどを通して、これらの頸癌細胞株の悪性形質に与える影響を調べた。具体的には、hsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の発現は増えることで、各頸癌細胞株の増殖、運動及び浸潤能が有意に促進されることが判明した。逆にhsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の発現を低下させた結果、各頸癌細胞株の増殖、運動及び浸潤能が有意に抑制される成果を得た。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究計画に基づき環状RNAを過剰発現させ、機能解析のための細胞実験を行った。主に細胞研究を担当していた分担者の突然の帰国、研究離脱があったために実験系の再構築に時間を要したことや、予想していた実験結果がなかなか得られないこともあり、計画よりやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
環状RNAと抗がん剤耐性の関連を検討するために、頸癌細胞株において、hsa-circ_0003572及びhsa-circ_00018289の発現抑制や強制発現を行い抗がん剤の感受性の変化を検討する。また環状RNAの発現変動に関連する分子レベルの変化を定量PCRにより解析し、環状RNAの発言が細胞機能に与える影響の分子機構を検討する。細胞研究は研究代表者と新たな研究協力者が実施するため研究を予定通り遂行できる。
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