| Project/Area Number |
22K09641
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
澤田 健二郎 大阪大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (00452392)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小玉 美智子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 講師 (70791391)
木瀬 康人 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (90778531)
中村 幸司 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (00900151)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 卵巣がん / 環状RNA / 高異型度漿液性腺癌 / 子宮内膜症関連癌 / バイオマーカー |
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| Outline of Research at the Start |
卵巣癌の組織型の約75％を占める高異型度漿液性卵巣癌と子宮内膜症関連卵巣癌の組織および対側の正常卵巣より RNA を抽出し、circular RNA microarray を行い、卵巣がん特異的に発現が亢進している環状 RNA を同定し、その機能を明らかにし、腹膜播種進展に果たす役割を解明する。動物実験として、卵巣癌組織を免疫不全マウスに移植するPatient-derived xenograft (PDX) model を用い、臨床応用につながる成果を創出する。患者血漿を用いて、デジタル PCR 法により血漿中の環状 RNA の発現量を定量し、そのバイオマーカーとしての可能性を証明する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和5年度は、卵巣明細胞腺癌（以下OCCCとする）の解析を行った。具体的には、2 症例の OCCC 癌患者の癌組織と対側の正常卵巣よりRNAを抽出し、circRNA microarrayを行い、2 症例ともに特異的に高発現している circSOD2 に着目した。In vitro の実験系において OCCC 細胞株であるOVISE細胞、ES-2細胞に circSOD2 の siRNA を transfection し、細胞浸潤能が低下することを示した。circRNAの miRNA sponge 機能に着目し、In silico 解析で circSOD2 と結合する miRNA として miR-224-5p を検討し、その結合を RNA pull-down assayで確認した。Proteomics 解析で、circSOD2をノックダウンすると発現が有意に低下するタンパク質の同定を行い、その中で細胞浸潤に関連する RDX と SDC4 に着目し、それらの発現が circSOD2 により制御されていることをwestern blot で確認した。さらに In vivo 実験においてもcircSOD2 の発現抑制は卵巣癌モデルマウスにおける腹膜播種を抑制していた。以上、OCCC の発がんにおける circSOD2 の役割を解明し、治療標的となる可能性を提示した。一連の研究成果は2023年の第75回日本産科婦人科学会で口演発表した。現在、論文投稿準備中である。
高異型度漿液性癌（以下HGSOC）に対しても同様の検討を行い、HGSOC 特異的に発現が症状するcircERSP1 を同定した。circERSP1 がmiR-182-5p をSpongeしてCDK1 の発現を制御し、HGSOC の増殖に関わっていることを証明し、一連の研究成果を2024年の第76回日本産科婦人科学会で口演発表した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
卵巣癌明細胞癌2症例、高異型度漿液性腺癌2症例で環状RNAのマイクロアレイを行い、それぞれの組織型に特異的に発現が上昇する環状RNA、circSOD2とcirc ESRP1を同定することができた。また明細胞癌に関しては19症例でのcircSOD2の発現を検討し、臨床検体におけるバイオマーカーの可能性を提示した。さらにそれぞれの細胞株を用いた機能解析を行い、それぞれのがん浸潤や増殖能に関わる役割を同定することができた。おおむね計画どおりに研究が遂行しているものと考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和6年度はこれまでの研究で同定した環状 RNAの抑制の腹膜播種治療の可能性を siRNA を用いて検討する。OCCCに関しては、すでに動物実験を開始しており、有望である結果を得ている。結果がそろい次第、論文報告する予定である。HGSOC に関してはすでにTarget であるCDK1を同定している。さらにCDK1のHGSOCの進展における役割を明らかにし、In vivo 実験まで進めていく予定である。令和6年度末の論文投稿を目指して研究を進めていく予定である。
In vivo 実験はまずは従来のヒト卵巣癌細胞株の免疫不全マウスへの腹腔内移植による Cell line-derived xenograftで行う。有効な結果が得られれば、免疫不全マウスに患者由来の腫瘍組織の一部を移植することにより腫瘍の Heterogenicity を忠実に再現する Patient-derived xenograft (PDX) model を用いる。卵巣癌組織片を小切開し、マウス ovarian bursa に移植する同所移植 PDX マウスモデルの作成はすでに開始しており、これまでに3例ですでに作成に成功している。同所移植 PDX モデルはヒトの癌そのものの組織型・ゲノム異常・タンパク発現などを忠実に保ち、マウスモデルにおける抗腫瘍効果は、ヒトへの臨床効果と強く相関する。作成した PDX マウスモデルに対して、先行論文に準じて、0.20 μgの circRNA siRNA-engineered exosomes を48時間ごとに3週間、腹腔内投与し、その治療効果をマウスの腹水量、腫瘍重量、播種の個数で検討する。
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