老化細胞除去薬によるSjogren症候群の新規治療戦略

• Project/Area Number: 22K09936
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 57020:Oral pathobiological science-related
• Research Institution: Tsurumi University
• Principal Investigator: 尾曲 大輔 鶴見大学, 歯学部, 助教 (10608699)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松本 直行 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (20386080) ; 中山 亮子 鶴見大学, 歯学部, 助教 (50749843) ; 山崎 智恵 鶴見大学, 歯学部, 学部助手 (80817122)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2022)
• Budget Amount: ¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000); Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
• Keywords: シェーグレン症候群 / p16INK4a / 老化細胞 / 老化細胞除去薬 / SASP因子

Outline of Research at the Start

シェーグレン症候群（SS）は免疫のバランスが崩れることで、唾液腺や涙腺に炎症が生じてドライマウスやドライアイなどの症状を示す自己免疫疾患であるが、その発症機序は不明で症状を和らげる治療が主流である。一方、近年では持続的な（慢性）炎症性疾患の発症に老化した細胞（老化細胞）の関与が示されている。老化細胞の増加やその分泌物によって慢性炎症の長期化と自己組織を攻撃する白血球の活性化が起こり、自己免疫疾患を引き起こすと考えられている。本研究では、SSの成立機序における老化細胞の関与を検討し、老化細胞の除去薬による病状改善の可能性について解析する。

Outline of Annual Research Achievements

老化細胞は加齢に伴い全身的に増加することが知られている。また、老化細胞の分泌物（SASP因子）は持続的な（慢性）炎症疾患の1つであるシェーグレン症候群（SS）の発症に関与することも考えられている。本研究では、SSの成立機序における老化細胞の関与を解析し、老化細胞除去薬による病態改善の可能性について検討することを目的とし、マウスの唾液腺を試料とした分析を実施した。
初年度では、老化細胞の指標であるp16INK4aに着目し、唾液腺でも加齢に伴ってp16INK4a陽性老化細胞の出現やSASP因子が発現していることを確認するため、老齢（84週齢）と若齢（10週齢）マウスの唾液腺から抽出したRNA試料を用いて、quantitative RT-PCRを行った。
その結果、p16INK4aの遺伝子発現量は、老齢マウスが若齢マウスより有意に高く、SASP因子であるインターロイキン（IL）1α、IL1β、IL6や腫瘍壊死因子（TNF）αなどの遺伝子でも老齢マウスが有意に高かった。
これらの結果から遺伝子レベルでは唾液腺も例外ではなくp16INK4a陽性細胞が増加していることと、SASP因子が分泌されていることが示唆された。さらに、H-E染色標本では導管周囲に白血球（リンパ球と形質細胞）の浸潤がみられ慢性炎症の所見が観察された。
その上でp16INK4a陽性細胞の局在を組織学的に検討するため、免疫染色の最適条件の確立を試みている。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

免疫染色の最適条件は確立しつつある。しかし、老齢マウスの頭数の確保に時間を要している点と、確保できた少ない試料での先行試験では結果の再現性が得られておらず、さらなる検討が必要であるため。

Strategy for Future Research Activity

前述のように、p16INK4a陽性細胞の局在を組織学的に検討している。老化細胞はSASP因子を分泌することで慢性炎症を引き起こすことが知られているため、腺上皮細胞や導管上皮細胞だけではなく浸潤してきたリンパ球や形質細胞のp16INK4aの発現についても検討する。さらに高齢マウスを２群にわけ、老化細胞除去薬の投与群と非投与群で唾液分泌量の変化の測定、p16INK4aやSASP因子の発現量の変化、リンパ球や形質細胞の遊走の程度を解析する。また、SSに類似した分泌障害を呈するNODマウスを用いて同様に実験し検証する。