Project/Area Number |
22K10147
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
新谷 智章 広島大学, 病院(歯), 講師 (90403518)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡本 哲治 東亜大学, その他の研究科, 教授 (00169153)
檜垣 美雷 広島大学, 病院(歯), 助教 (40826856)
林堂 安貴 広島大学, 病院(歯), 講師 (70243251)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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Keywords | HBp17/FGFBP / 扁平上皮細胞 |
Outline of Research at the Start |
Heparin-binding protein 17/FGF-Binding Protein (HBp17/FGFBP)は、A431細胞の培養上清よりFGF-2とともに分離・精製した、ヘパリン親和性分泌蛋白であり、上皮細胞で特異的に発現していた。 CRISPR/CASシステムを用いて、HBp17/FGFBP遺伝子をknockout (KO) したA431細胞および正常扁平上皮細胞を作成する。コントロール細胞に比べ、腫瘍増殖、細胞運動能や造腫瘍性を調べる。両細胞の発現分子の網羅的解析を行う。
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Outline of Annual Research Achievements |
HBp17/FGFBPは我々の研究室にて分離・精製された、17kDaのヘパリン親和性分泌蛋白であり、上皮細胞で特異的に発現し、FGF-1、FGF-2と可逆的に結合することから、FGFのスイッチ分子として標的細胞でのFGFの遊離・活性化に深く関与していることが考えられる。そこで、扁平上皮癌(SCC)/口腔扁平上皮癌(OSCC)細胞におけるHBp17/FGFBPの機能および分子標的としての可能性を明らかにするため、我々はこれまでに以下の研究を行った。 造腫瘍性を欠失しHBp17/FGFBP遺伝子を発現していないA431の亜株である#4クローンにHBp17/FGFBP遺伝子を導入すると、in vitroでの増殖能はA431#4細胞に比べ著しく亢進し、ヌードマウス背部皮下での造腫瘍性を獲得した。 SCC/OSCC細胞において、活性化ビタミンD3(活性化VD3)がNF-κBシグナル経路を抑制することにより、HBp17/FGFBPの発現を抑制することや、SCC/OSCC細胞の培養上清中へのFGF-2の遊離を抑制することを明らかにした。さらに、エルデカルシトール(以下ED-71)は、活性化VD3の2β位にヒドロキシプロポキシル基が導入された活性化VD3の誘導体であり、代謝酵素CYP24A1による代謝を受けにくい特徴を有している。ED-71がVD3と同様にSCC/OSCC細胞の増殖を抑制すること、ED-71のIC50は活性化VD3の約1/100の低濃度であることを明らかにし、ED-71はA431細胞由来マウス背部皮下腫瘍に対し、増殖抑制効果を示すことを明らかにした
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
gRNA+Cas9発現プラスミドとノックイン用ドナーベクター(GFP-Puro)をA431細胞に共導入を試みたが、リポフェクション法では遺伝子導入がうまくいかず、最終的にエレクトロポレーション法を用いた。
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Strategy for Future Research Activity |
gRNA+Cas9発現プラスミドとノックイン用ドナーベクター(GFP-Puro)をA431細胞と不死化口腔正常上皮細胞へトランスフェクションを行う。
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