| Project/Area Number |
22K10182
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Tsurumi University |
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Principal Investigator |
舘原 誠晃 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (90380089)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
井出 信次 鶴見大学, 歯学部, 助教 (00611998)
竹部 祐生亮 鶴見大学, 歯学部, 助教 (50807097)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2024: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
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| Keywords | 再生医療 / 難治性炎症疾患 / 間葉系幹細胞 / 歯髄幹細胞 / 培養上清 / 口腔粘膜疾患 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究では、幹細胞が有する損傷組織また臓器での再生環境整備機能を応用して、免疫過剰反応を有する疾患の新規治療薬の開発目的とする。具体的にはGVHDモデルマウスの肝臓または腎臓の凍結切片上で歯髄幹細胞を培養し、歯髄幹細胞が産生する液性因子を回収および解析することにより免疫過剰反応に関連する疾患に有効な因子を同定すると共にこれらの因子を疾患モデルマウスに投与することにより治療薬としての有用性を検討する予定である。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、慢性移植片対宿主病:Graft-versus-host-disease (GVHD)などの免疫過剰反応疾患に対して歯髄幹細胞が有する再生環境整備機能の有用性を検討することである。 本年度では、歯髄幹細胞を80%コンフルエントまで培養し、この時点でIFN-γを200 ng/mlを培養液に加えて24時間培養後、新鮮培養液に交換し、さらに24時間培養後に培養上清を回収した。INF-γ刺激下歯髄幹細胞の培養上清をGVHDの発症機序に中心的に関わっているTh17細胞に関連するサイトカイン（GM-CSF, IFN-γ, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-Rp70, IL-13, IL-17, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-23, IL-28, MIP-3a, TGF-beta, TNF-arfa, TNF-beta）の産生量について抗体マイクロアレイにて検討を行った。その結果、培養上清およびINF-γ刺激下培養上清では、IL-2, IL-21, IL-23, TNF-betaは培養液単体と比較して経時的に有意に減少した。一方、IL-6と INF-γ値は上昇した。この結果より、これらの因子が免疫疾患の抑制に関与する可能性が示唆された。
また脾臓細胞移入により作成した慢性GVHDマウスに各培養上清を1か月間投与し、その効果について顎下腺を摘出して組織学的に検討した。その結果、GVHDマウスの顎下腺の導管周囲にリンパ球浸潤を一部認めた。しかし、培養液のみ、培養上清、INF-γ刺激下培養上清を投与した群との差は認められなかった。現在、口腔粘膜、肝臓、腎臓の組織切片を作成し、組織学的検討を継続している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
現在の社会情勢の影響により、研究試薬の価格高騰及び輸送の遅延等により、必要な研究試薬の入手や受託用検体の輸送が円滑に進まず研究にやや遅れている。また、予測した結果が得られていないため、計画を一部変更したことも研究の進捗に影響している。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度の抗体マイクロアレイの結果より興味深い結果を得られたため、再現性を確認するとともに細胞株を変更して再評価を行う予定である。また、慢性GVHD疾患モデルマウス実験では、脾臓細胞の移入から早期の段階より培養上清を投与したためか、顎下線組織においてはコントロールとの明らかな差が得られなかった。このことから、脾臓細胞の移入後、GVHDの症状を一部確認した時期から培養上清を静脈投与する方法に研究計画を変更する予定である。得られた検体から組織学的検討を行い、培養上清の効果を評価し、さらに免疫組織学的検討により効果の機序を解明する予定である。
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