| Project/Area Number |
22K10229
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Health Sciences University of Hokkaido |
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Principal Investigator |
藏滿 保宏 北海道医療大学, 医療技術学部, 教授 (50281811)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
良沢 昭銘 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (60363123)
永易 裕樹 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (90265075)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥520,000 (Direct Cost: ¥400,000、Indirect Cost: ¥120,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
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| Keywords | 口腔扁平上皮癌 / 被包化 / 肝細胞癌 / トランスクリプトーム解析 / プロテオーム解析 / 浸潤 / 転移 / 被膜化 / プロテオーム / トランスクリプトーム |
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| Outline of Research at the Start |
HCCの被膜維持が癌の浸潤・転移抑制の一因となる可能性を仮定し、被膜維持と破綻を分子レベルでの比較により被膜維持に関与する分子を同定し、OSCC組織の被包化を試みる。具体的には以下の３つの問いに対して被膜(+)vs被膜(-)HCC組織の比較プロテオーム解析ならびにトランスクリプトーム解析、さらに被膜維持関連分子制御によるOSCC被包化の実験的試みにより対応する。問1. 口腔扁平上皮癌（OSCC）の浸潤・転移をどうやって防止できるのか？問2. 肝細胞癌（HCC）の被膜を保持しているメカニズムはどうなっているのか？問3. HCCの被包化保持を活性化させる機序でOSCCを被包化できるのか？
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| Outline of Annual Research Achievements |
『外科的切除で完全に切除できなかった口腔扁平上皮癌（OSCC）をまるごと包み込んで周りの組織に浸潤できなくする』ことを目的に、残余癌を被包化することで、周辺の組織に浸潤するのを阻害させることで残余癌の浸潤を抑える事を最終目標としている。つまり本研究では、これまでの転移抑制の試みとは全く異なるアプローチで『外科的切除で完全に切除できなかったOSCCをまるごと包み込んで周りの組織に浸潤できなくする』ことを目的としている。
肝細胞癌HCCは初期においてHCC組織が被膜により被包化されていることがよく見られる。このメカニズムを利用してOSCCを被包化して浸潤阻害するためにこの肝細胞癌の被膜維持に必須の分子を同定し、活性化させることで被膜形成を行いOSCC組織を被包化することができれば、外科切除術後に再発・浸潤・転移する癌から患者を守ることが期待できる。
共同研究施設である山口大学附属病院第二外科から被膜化肝細胞癌組織と被膜破綻肝細胞癌組織を供与してもらい、それらの比較プロテオーム解析と比較トランスクリプトーム解析によって被膜化維持分子を同定することを行っている。共同研究施設から被膜化肝細胞癌組織のFFPEブロック6例、被膜破綻肝細胞癌組織FFPEブロック12例、被膜化していない肝細胞癌組織FFPEブロック11例を供与してもらい、まず被膜成分同定のために北海道大学病院バイオバンクでレーザーマイクロダイゼクション（LMD）を用いて被膜成分のみ抽出した。トリプシン処理も完了して北里大学理学部附属疾患プロテオミクスセンターの小寺義男教授に被膜成分の同定を依頼し解析結果を獲得している。
また、被膜化肝細胞癌組織、被膜破綻肝細胞癌組織、被膜化していない肝細胞癌組織の全てのFFPEブロックから癌部と非癌部をLMDを用いて抽出した。現在DNAマイクロアレイを用いてトランスクリプトーム解析を実施中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
理由
（１）共同研究施設である山口大学病院から被膜化肝細胞癌組織と被膜破綻肝細胞癌組織を供与してもらい、それらの比較プロテオーム解析と比較トランスクリプトーム解析によって被膜化維持分子を同定しているが、先方の倫理委員会の承認を得るのに予想以上に時間がかかったことが遅れの最大の理由の一つである。
（２）LMDは北大病院バイオバンクでライカ社の最新の機器を利用させてもらっているが、切除した組織の回収にかなり時間がかかり、1日かけて1症例分しか回収できなかったため、時間がかなり取られたことが遅れの理由の二つ目である。
（３）LMDで回収したFFPEの組織中のRNAの劣化が予想を超えて激しいため、RNAの品質がかなり悪く、再度LMDによる回収を余儀なくされたため、時間が殊の外かかってしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
（１）LMDによって切り出した被膜成分を既にFFPEから抽出し、トリプシン消化を完了して共同研究者である北里大学理学部附属プロテオミクスセンターに送付して質量分析を行ってもらった結果、いくつか被膜組成成分の蛋白質が同定された。いくつかは、免疫組織染色により確認されたが、いくつかの蛋白質は確認できなかったため、再度確認を行って被膜分子の同定を完了する予定である。
（２）被膜成分ではない癌組織の癌細胞と周辺の間質細胞部分をLMDによって切り取っているので、それらを用いて被包化有りのサンプルと被包化なしのサンプルの比較トランスクリプトーム解析をDNAマイクロアレイによって行う。
（３）トランスクリプトーム解析によって同定された被包化関連候補分子をヒト線維芽細胞に遺伝子導入して強制発現させて、被膜成分の分子の発現増強の有無をモニターしながら候補分子を決定する。
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