| Project/Area Number |
22K10245
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57070:Developmental dentistry-related
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
早野 暁 岡山大学, 大学病院, 講師 (20633712)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宝田 剛志 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (30377428)
井澤 俊 岡山大学, 医歯薬学域, 准教授 (30380017)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | Filamin A / 口蓋発生 / Fillamin A / 口蓋裂 |
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| Outline of Research at the Start |
口蓋の発生において重要なシグナル伝達経路が多く解明されてきたが、口蓋癒合の根幹をなす発生メカニズムは未だ明らかとなっていない。口蓋突起の癒合に関する研究として、TGF-βシグナルが注目されているが、実際に癒合部の上皮が細胞死あるいはオートファジーによって消失するのか、上皮間葉転換により間葉系細胞へと変化するのか、その答えは依然として不明のままである。本研究では、我々が着目するアクチン結合タンパクFilamin Aの遺伝子改変マウスを用いたin vivo実験により、口蓋突起の癒合の分子メカニズムの検討を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的である、口蓋突起癒合部におけるFilamin A (Flna)の発現が口蓋の発生に与える影響を調べるため、2023年度には主に以下の３項目の研究を実施した。
①遺伝子改変マウスの解析：昨年度に作成した、KRT14-CreマウスおよびFlna floxマウスを交配し、胎生13.5日および14.5日のKRT14-Cre, Flna floxマウスを解析した。口蓋組織の薄切切片を作成し、蛍光免疫染色法を用いてFLNA, E-cadherinおよびTGF-betaシグナリングの下流で発現するタンパクの産生を対照群と比較した。この研究を通して口蓋突起部上皮消失の重要な因子であるTGF-βとFlnaとの関係を検討した。
②上記の胎生13.5日および14.5日のKRT14-Cre, Flna floxマウスの口蓋組織を摘出後、器官培養を行い、メカニカルストレスがKRT14-Cre, Flna floxマウスおよび対照群の口蓋組織に与える影響を検討した。この研究を通して口蓋突起部上皮消失の重要な因子であるFlnaとメカニカルストレスとの関係を検討した。
③昨年度に引き続き、Nanostring社のGeoMXを用いた空間的トランスクリプトーム解析を行うための準備実験を行なった。胎生14.5日のKRT14-Cre, Flna floxマウスの口蓋組織のパラフィン薄切切片を作成し、GeoMXのコールドランを行い、パラフィン切片で作用する抗体の選出を行なった。
さらに、これまでの結果を纏め、Developmental cell, Nature communications, EMBO, Journal of Clinical Investigationなど幾つかの発生学の雑誌に投稿したが、まだ論文受理には至っていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現在までに予定していたin vivo, in vitro, in silico研究のほとんどを終えた。論文受理までには至っていないが、研究計画において最終年度に予定していた論文投稿まで行なっている点からすると、計画以上に進んでいると考えることも出来る。しかし、今後は査読結果にて指摘された項目を補完するための実験を行う必要があり、その点では概ね順調に進んでいると言える。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでに受け取った査読結果を元に、論文原稿に修正を加えていく。また、報告されている口蓋組織のsingle cell RNA seqデータをダウンロードし、それを解析することによって、今回得られた研究結果に関するエビデンスを補強する。
さらに、KRT14-Cre, Flna floxマウス口蓋組織の空間的トランスクリプトーム解析を行うため、GeoMX解析の環境設定を引き続き模索していく。
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