Project/Area Number |
22K11433
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 59010:Rehabilitation science-related
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Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
Principal Investigator |
掛橋 千彰 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 研究技術員 (80535683)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
舩橋 利也 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70229102)
萩原 裕子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (90468207)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
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Keywords | Sema3a / 遅筋 / 速筋 / ケトン / Floxマウス / AAV / Cre / 骨格筋 / セマフォリン / Sama3A |
Outline of Research at the Start |
ケトン食の作用機序と有用性を動物実験により検証し、運動模倣食としてのケトン食という概念を提唱する。本研究では、ケトン食摂取後の骨格筋の筋線維組成、有酸素性代謝指標および全身レベルの持久能力を評価基準として、骨格筋の有酸素性代謝能改善の機序、Sema3A-KOマウスにおけるケトン食摂取の効果、ケトン食が個体の全身および筋持久力に及ぼす効果、を明らかにする。
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Outline of Annual Research Achievements |
ケトン餌による骨格筋の遅筋化にSama3aが関与しているのかを明らかにすることを目的として、Sema3a floxマウスとACTA1 -Creマウスを掛け合わせて、骨格筋特異的にタモキシフェンでSama3aがknockoutされるマウスを作成することを試みた。しかし、Sama3aがknockoutされた筋繊維とそうでないものが混在する、つまり、キメラのほうが解析に有利と考え、AAVでCreを発現させることにした。こうすることによりAAVを発現した筋繊維ではSema3aがknockoutされ、発現していない筋繊維ではSama3aが機能している。したがって本年度は、1)骨格筋に発現するAAVベクターの探索、2)筋繊維タイプの解析、3)Sema3a floxマウスの導入、を行った。その結果、1)MyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40の作成、2)前脛骨筋(Tibialis anterior: TA)、長趾伸筋(Extensor digitorum longus: EDL),腓腹筋(Gastrocnemius: GC),ヒラメ筋(Soleus: SOL)を摘出する方法を確立し、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、laminin、Sema3aの3重蛍光免疫染色の最適化、3)Sema3a floxマウスの導入、を行った。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ケトン餌による遅筋化にSema3aが関わるのか、の解析のためのツールは全て整い、現在、遅筋化について解析を進めているので、全行程の25%程度は消化していると考えられるため。
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Strategy for Future Research Activity |
今後は、Sema3Aのfloxマウスの腓腹筋にMyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40を発現させ、ケトン餌で飼育の前脛骨筋、長趾伸筋)ヒラメ筋の遅筋化を、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、の各筋繊維タイプの変化とSema3aの関係を解析する。
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