| Project/Area Number |
22K15011
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 42020:Veterinary medical science-related
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
南 昌平 大阪大学, 微生物病研究所, 特任研究員(常勤) (80889460)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
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| Keywords | コロラドダニ熱ウイルス / マダニ媒介性感染症 / リバースジェネティクス / 人獣共通感染症 / リバースジェネティクス法 |
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| Outline of Research at the Start |
コロラドダニ熱ウイルス(CTFV)はマダニを媒介してヒトに感染し、インフルエンザ様の症状を示す病原体である。国内でも近縁のウイルスがマダニや野生動物から見つかっている。効果的な治療法は存在せず、ウイルス性状のほとんどが未だに不明なままである。本研究では、CTFVの基礎応用研究に貢献することが期待できるウイルスの遺伝子改変技術（リバースジェネティクス）の確立を試みる。既にCTFVと同属ウイルスのリバースジェネティクスは確立されており、CTFVでも確立することが可能であると予想する。人工ウイルスを用いた解析により、ウイルス蛋白質の機能や治療薬の探索を行うことでCTFV研究の発展を目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度、確立したリバースジェネティクス法を用いた組換えコロラドダニ熱ウイルス(CTFV)の回収効率を上げるためにCTFVを様々な培養細胞へと感染させ、その増殖性を検討した。その結果、検討したすべての細胞株でCTFVは増殖することがわかり、いくつかの細胞株はリバースジェネティクス法に用いているBHK-T7/9細胞やVero細胞よりも高い増殖性を示した。
そこで、トランスフェクションしたBHK-T7/9細胞と共培養する細胞をVero細胞からCTFV高増殖性細胞へと変更することで回収効率と培養期間を短縮することに成功した。
また、この改善されたシステムを用いることで、VP12のC末端側にペプチドタグや350bpの大きさの外来遺伝子であるminiGFPが挿入された組換えCTFVを回収することができた。しかし、感染細胞ではminiGFPによる蛍光が確認できなかった。VP12の発現量が低いあるいはminiGFPが融合タンパク質として機能しにくい性質を持つことが考えられた。
また、抗原性の高いタンパク質としてVP5,VP7が候補として挙げられ、これらに対する抗血清の回収に成功した。今後は抗体を用いた解析も可能となった。
野生型CTFVをマウスやハムスターへ腹腔内、筋肉内、皮内接種によって感染させたが、ウイルスは殆ど増殖せず、動物モデルとしては不充分な病態であることが分かった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
リバースジェネティクス法は回収効率の改善ができ、より扱いやすい系となった。その結果、新たな組換えウイルスの回収にも成功し、性状解析が進んでいる。新たにCTFV VP6が増殖性に深くかかわることがわかり、研究課題を発展させた応用課題についても取り組めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は組換えウイルスに導入する外来遺伝子を最適化し、レポーターウイルスの作出を試みる。また、VP6をコードするセグメント6にいくつかの点変異を加えるとウイルス増殖性が低下することがわかった。この機序解明をリバースジェネティクス法による組換えCTFVを作出し、解析することで試みる。
動物モデルはウイルス力価が低いことを考慮し、超遠心によるウイルス濃縮を行った後に、高力価ウイルスの感染実験を再度行う。宿主の感受性を調べるために他系統のマウスやラットに対して感染させ、その病態を観察する。
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