Project/Area Number |
22K15030
|
Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 42040:Laboratory animal science-related
|
Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
鴨下 真紀 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (70930288)
|
Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
|
Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
|
Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
|
Keywords | オルガネラコンタクト / ペルオキシソーム / 小胞体 / 生殖 |
Outline of Research at the Start |
ペルオキシソーム(PO)や小胞体(ER)などのオルガネラは,物理的に接触(コンタクト)し相互作用することで様々な代謝反応を調節していることがわかってきた.哺乳類の細胞内ではPOの約70%がERとコンタクトしており,DHAの合成といった重要な反応に関与している.生体内でのDHAの合成は雌雄の生殖機能に必須であるが,PO-ERコンタクト自体が生殖機能に必須であるかは不明である.本研究では,PO-ERコンタクトを制御する繋留タンパク質の遺伝子ノックアウトマウスを作製・解析することでPO-ERコンタクトの生殖機能における役割を解明する.
|
Outline of Annual Research Achievements |
ペルオキシソームや小胞体などの細胞小器官(オルガネラ)はそれぞれが物理的に接触(コンタクト)することで様々な代謝反応を調節している。哺乳類の細胞内では約70%のペルオキシソームが小胞体とコンタクトしているが、生殖機能における役割は不明である。本研究課題では、ペルオキシソーム-小胞体(PO-ER)コンタクトの生殖機能における役割を解明するため、CRISPR/Cas9システムによりPO-ERコンタクトを制御する繋留タンパク質の遺伝子acbd4および5を欠損させたマウスをそれぞれ作製した。acbd4/5欠損マウスの妊孕性を確認するため、作製したマウスと野生型の交配試験を実施した結果、若齢マウス(8週齢)はacbd4/5どちらの系統においても雌雄ともに妊孕性を有することがわかった。一方、acbd5欠損マウスでは雌雄ともに加齢に伴い妊孕性の低下がみられたため(N=1ずつ)、現在は加齢個体の妊孕性を解析中である。また、acbd4欠損マウスでは、遺伝子欠損精子を野生型卵、あるいは遺伝子欠損卵を野生型精子と体外受精を行い、若齢個体、加齢個体ともに受精率、発生率が低下しないことを確認した。 ACBD4/5はどちらもPO-ERコンタクトの繋留タンパク質であり、小胞体のVAPA/Bと結合することから、機能が重複していると考えられている。したがって、一方の欠損ではPO-ERコンタクトの現象が不十分な可能性があり、現在acbd4/5ダブルノックアウトマウスの作製を試みており、マウスが作製でき次第交配試験や体外受精を行う。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
目的の遺伝子欠損マウスの作製を行い、若齢個体での交配試験はほぼ完了した。また、acbc5欠損マウスにおいては加齢個体での妊孕性低下の可能性を見出し、今後詳細に検討する。上記の遺伝子欠損マウスの作製および交配試験には時間がかかるため、初年度の進捗としてはおおむね順調とした。
|
Strategy for Future Research Activity |
acbc5欠損マウスにおいては加齢個体で引き続き交配試験および体外受精を行い妊孕性を解析する。妊孕性の低下が確実になった場合は、雌雄どちらに要因があるか詳細に調べる。加齢個体を使用する実験は時間がかかるため、作製した遺伝子欠損マウスから培養細胞を作製し、オルガネラコンタクトの動態について調べる。また、現在作製中のacbd4/5ダブルノックアウトマウスについても同様に解析を行う。
|