ミトコンドリアに輸送される新奇核コードRNAの網羅的探索
| Project/Area Number |
22K15108
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Review Section |
Basic Section 44010:Cell biology-related
|
|---|
| Research Institution | Kyoto Sangyo University |
|---|
Principal Investigator |
篠田 沙緒里 京都産業大学, 生命科学部, 研究員 (60873205)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2024-03-31
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
|
| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
|
|---|
| Keywords | ミトコンドリア / ミトコンドリア輸送 / 機能性RNA / 近位依存性標識法 / smFISH / 酵母 / RNA-seq / 蛍光in situ ハイブリダイゼーション |
|---|
| Outline of Research at the Start |
ミトコンドリアは, ミトコンドリアの外からタンパク質や脂質を取り込むことで拡大し，その機能を維持している. 一方, 核ゲノムにコードされたRNAもミトコンドリアに輸送されることが複数の生物種で報告されている. しかし, タンパク質や脂質の取り込みと異なり, RNAに関しては，輸送されるRNAの種類や輸送経路, 輸送の生理的意義など多くが不明である. 本研究は, ミトコンドリアRNAの新規ラベル化手法の確立から, ミトコンドリア内に存在する核コードRNAの同定を通して, ミトコンドリアへのRNA輸送の分子機構とその生理的意義の解明を目的とする.
|
| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までに確立したミトコンドリア内RNA特異的ラベル化法により同定した候補遺伝子の詳細な解析を行った. まずRNAが輸送されるメカニズを解析するために, in vito RNA輸送再構成系の構築を目指した. 過去の研究では放射性同位体を用いたRNA輸送再構成が報告されているが, より簡便かつ安定した手法の構築を検討した. 酵母から単離した蛍光標識したミトコンドリアと, in vitro転写により別の蛍光色素でラベルしたRNAを用いて顕微鏡下でミトコンドリアへ輸送されたRNAの検出に成功した. これまでの近位依存性標識法とRNA細胞内局在と合わせて, in vitroでの輸送が確認できたことから, 本研究により同定したRNAがミトコンドリアへ輸送されることが明らかとなった. 次に, 同定した遺伝子の機能解析を行うために, 様々な条件で培養した酵母株での同定したRNAの細胞内局在をFISHにより観察した. その結果, ミトコンドリアストレス条件下において同定したRNAがミトコンドリアに蓄積したことから, ミトコンドリアに輸送されたRNAはミトコンドリアのストレスに応答して何らかの機能を発揮する可能性が示唆された.
研究期間を通して, ミトコンドリアへ輸送されるRNAの新規探索手法開発および, 候補遺伝子が真にミトコンドリアへ輸送されることを検証する一連の実験系の構築を行った. この解析から, 新規遺伝子の同定に成功し, 出芽酵母におけるミトコンドリアでの機能についても一定の知見が得られた.
|
Report
(2 results)
Research Products
(7 results)
