Project/Area Number |
22K16354
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 54020:Connective tissue disease and allergy-related
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
土屋 遥香 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (50868560)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
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Keywords | 関節リウマチ / 滑膜 / シングルセル解析 |
Outline of Research at the Start |
近年、RA治療は、生物学的製剤等の登場により劇的に発展した。しかし、いまだ臨床的寛解達成率は約30-40 %にとどまり、国際的なRAの治療目標である「関節炎の早期鎮静化と関節構造破壊の防止・機能維持」は多くの患者で未達成である。その要因の1つに、患者間に存在する治療反応の不均一性があり、個々の患者に対する治療の最適化を目指す予測モデルの構築が求められている。本研究は、本邦の従来型合成抗リウマチ薬の効果が不十分なRA患者の関節滑膜・末梢血scRNA-seq解析と、TNF-α阻害剤による治療強化にあたり前向きに収集する臨床情報を統合することで、治療反応性に関連する免疫学的特徴の解明を目指す。
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Outline of Annual Research Achievements |
令和4年度は、RA分類基準(ACR/EULAR 2010年)を満し、発症早期(1年以内)、MTX-IR(MTXが3か月以上投与されても低疾患活動性以下に未到達)の患者から、研究内容に関して文書説明と同意を取得した。同意が得られた患者から、治療開始前の臨床情報(年齢・性別・自己抗体・疾患活動性評価指標・身体機能障害評価指標等)、関節滑膜(超音波ガイド下滑膜針生検などを用いて採取)・末梢血を収集した。関節滑膜の細胞懸濁液から分離した単核球に、CITE-seq抗体の添加と免疫蛍光染色を施し、フローサイトメーターを用いて生細胞を分取した(1検体あたりの目安: 10,000細胞)。10x Genomics Chromiumシステムを用いてシングルセルライブラリーを調整した。この一連の工程において、データの質の担保とコスト削減の両立を目指すため、プロトコルを改善した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
令和4年度は、1)患者リクルート・文書による説明・同意の取得、2)臨床情報・関節滑膜・末梢血の収集、3)生細胞の分取とシングルセルライブラリーの調整を目標としており、上述の如く当初の目標を達成した。
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Strategy for Future Research Activity |
令和5年度は、初年度に調整したシングルセルライブラリーを用いて、次世代シーケンサ―NovaSeq 6000(Illumina)による150 bp pair end sequenceを実施する。得られたシーケンスデータと、ベースラインおよび前向きに取得する臨床情報を統合的に解析し、治療抵抗例と非抵抗例における細胞分画の差異を比較する。また、両者間で有意差のある細胞分画が特に発現する炎症メディエーターを解析し、治療抵抗性の獲得メカニズムに迫る予定である。
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