Verification of DOHaD theory from the perspective of fatty acid metabolism in pancreatic beta cells and application to diabetes regenerative medicine
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22K16395
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 54040:Metabolism and endocrinology-related
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
佐々木 周伍 大阪大学, 大学院医学系研究科, 特任助教(常勤) (60908185)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 膵β細胞 / iPS細胞 / 脂肪酸代謝 / 糖尿病 / DOHaD |
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| Outline of Research at the Start |
糖尿病の有望な新規治療法に、失われた膵β細胞そのものを補充する細胞治療がある。その実現にはβ細胞発生学の知見が手掛かりとなる。妊娠期の母体栄養環境が子の成人期糖尿病発症に関わることが知られているが（DOHaD学説）、β細胞発生過程ですでに起きている変化は検討されていない。私は以前分化早期β細胞が意外にも脂肪酸代謝関連遺伝子を高発現していることを見出した。本研究ではヒトiPS細胞を用いてβ細胞発生を再現し、ヒトβ細胞成熟に伴う細胞内脂肪酸代謝変化を解明し、子宮内栄養環境悪化が子のβ細胞発生に与える影響を検討する。さらに明らかとなった代謝物変化に介入することによりβ細胞分化誘導法の効率化を目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウスの胎生後期（16.5日）β細胞のシングルセル・トランスクリプトーム解析によって、分化早期β細胞が脂肪酸代謝関連遺伝子（Abcd3, Crot, Hadh, Acly, Mlxipl）を高発現している時期があることを見出した。なかでもMlxiplはChREBPをコードする遺伝子であり、ChREBPは解糖系・脂質生合成（de novo lipogenesis）系酵素遺伝子の発現を誘導することで、糖質から脂肪への変換を促進する糖応答性転写因子であることが知られている。そこで、シングルセル解析結果を解糖系、脂質合成系に着目し、さらに詳細に解析した。擬時間解析の結果、β細胞の分化に伴い、解糖系酵素Gck, Pfkm, Ldha, Ldhbの遺伝子発現は不変または低下している一方で、脂肪合成酵素であるMlxipl, Srebf1, Acly, Acaca, Mcat, Fasnの遺伝子発現は増加していることが明らかになった。このことから、β細胞分化が進むにつれ、ChREBPの発現上昇を中心とした脂質合成経路が活性化することが示唆された。
次に、ヒト細胞でのβ細胞分化・成熟過程における脂質代謝変化についてヒトiPS細胞を用いて検討した。分化22日のヒトiPS細胞由来β細胞において、MLXIPLをはじめとした脂質合成関連遺伝子の発現上昇が認められた。さらに細胞内脂肪合成後の結果である脂肪滴もβ細胞分化に伴った増加が観察され、合わせて脂肪滴形成に必要な遺伝子PLIN2も分化段階に合わせた発現上昇が認められた。以上から、マウスのみならずヒト細胞でも同様にβ細胞分化・成熟過程における脂質合成の重要性が明らかとなった。
現在、炎症性サイトカイン等を用いた妊娠糖尿病の培養皿上での再現に関する検討、小分子などを用いた脂質代謝経路への介入によるヒトiPS細胞由来β細胞分化誘導効率の改善を目指している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
安定的なヒトiPS細胞から膵β様細胞への分化誘導法を確立することができ、胎児の病態モデルとして、またβ細胞分化誘導効率の改善を目指すモデルとして使用している。まず、計画通り、マウスシングルセル解析データおよびヒトiPS細胞を用いた検討によって、マウスおよびヒト両者の膵β様細胞発生・成熟における脂肪酸代謝の重要性を示すことができた。次に、ヒトiPS由来膵β様細胞における定量的PCR、FACSや免疫染色のデータはすでに得られており、順調に進んでいる。現在、妊娠糖尿病の胎児への影響を培養皿上で再現するため、炎症性サイトカイン、糖、脂質等を用いた実験を行っている。また、ヒトiPS細胞由来β細胞分化誘導効率の改善を目指し、さまざまな小分子などを用いた脂質代謝経路への介入を行っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
ヒト膵β細胞発生・成熟過程における脂肪酸代謝動態を解明するため、最終代謝物を直接定量可能なリピドーム解析を行う。その際、脂質合成マスターレギュレーターであるChREBPのβ細胞分化における役割を直接解明するために、MLXIPLノックアウトヒトiPS細胞を作製している。野生型iPS細胞および本細胞を用いて、in vitro 3次元培養でβ細胞まで分化誘導後、β細胞新生から成熟までの発生学的に段階的なサンプルを得る。各分化段階の細胞内容を抽出し、SFC-MSを使用してリピドーム解析を行い、細胞内脂質代謝物の経時的変化を明らかにする。以上により、将来の糖尿病細胞治療に向けた知識基盤を構築する。
脂肪酸代謝介入によるヒトiPS細胞からの膵β細胞分化誘導法の効率化を目指す。まず、様々な分化誘導のタイミングで特定の脂肪酸を直接添加し、β細胞誘導効率を定量する。また、β細胞成熟化を促す可能性のある脂肪酸代謝を修飾する小分子・薬剤添加を探索する。その際、LINCSデータベースを用いて候補をリストアップする。
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Report
(1 results)
Research Products
(9 results)
