| Project/Area Number |
22K16433
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 54040:Metabolism and endocrinology-related
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
竹田 裕介 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (90899238)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2024: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 肥満症 / Rho-kinase / 脂肪細胞 / ROCK2 / 血管内皮細胞 |
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| Outline of Research at the Start |
肥満は2型糖尿病の発症や糖尿病血管合併症進展の基盤病態である。低分子量GTP結合蛋白質Rhoと、その下流分子Rho-kinase（ROCK）は、血管内皮や脂肪組織における炎症を制御する。血管内皮における炎症は脂肪組織の炎症を引き起こし、代謝異常症の発症に繋がる。ROCKのアイソフォームのうち、ROCK2は血管内皮に高度に発現し、局所の炎症を引き起こす。本研究は、肥満症における血管内皮ROCK2の病的意義を解明し、治療的応用を検討する事を目的とする。独自に作製した血管内皮特異的ROCK2欠損マウスおよび肥満モデルの表現型と分子機序を解析し、ROCK2の病態意義を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
低分子量G蛋白Rhoのエフェクター分子であるRho-kinase（ROCK）にはROCK1、ROCK2という二つのアイソフォームが存在する。ROCKは、血管内皮や脂肪組織における炎症を制御することが示唆されている。近年、血管内皮における炎症が脂肪組織の炎症を引き起こし、代謝異常症の発症に繋がることが注目されている。
ROCK2は血管内皮に高度に発現し、局所の炎症を引き起こすことが明らかになっているが、このROCK2の生態における役割を解明するため、我々が独自に樹立したROCK2 floxマウスと、血管内皮特異的にCre recombinaseを発現するVE-cadherin Creマウスを交配し、血管内皮特異的ROCK2欠損マウス（ER2KO）を作製した。ER2KOはメンデルの法則に従って出生し、成長発達過程に異常は認められないが、脂肪細胞の重量や白色脂肪細胞における褐色化マーカーの発現レベルに変化を認めており、この意義を解明すべく検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ROCK2 floxマウスと、血管内皮特異的にVE-cadherin Creを発現するVE-cadherin Creマウスを交配し、血管内皮特異的ROCK2欠損マウス（ER2KO）の作製、維持に成功している。ER2KOの表現型解析もおおむね予定通りに進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
血管内皮特異的ROCK2欠損マウス(ER2KO)の脂肪細胞の形態を観察し、ROCK2欠損によって生じる表現型解析をさらに進める。具体的には、白色脂肪細胞（内臓脂肪）だけでなく、皮下脂肪や褐色脂肪細胞においても、褐色化マーカーの発現レベルや脂肪細胞のサイズの解析を行う。
次に、脂肪細胞におけるROCK2と褐色化の間に介在する詳細なシグナルを明らかにするために、vitroにおける解析も行う予定である。すなわち、ROCK2遺伝子をノックダウンしたヒト脂肪組織微小血管内皮細胞（HAMEC）の培養液（conditioned medium）を用いて脂肪細胞を培養し、回収した細胞における褐色化マーカーの発現レベルを検討する。さらに、このconditioned mediumを試料として、LC-MS法にてタンパクの網羅的な定量・同定を行う予定である。
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