| Project/Area Number |
22K16846
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
|
|---|
| Research Institution | Hyogo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
脇本 裕 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (20771215)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
|
| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
|
|---|
| Keywords | 脱細胞化 / 微小残存病変 / 人工卵巣 / 再構築卵巣 / 卵巣移植 / 卵巣凍結 / 再生医学 / 再細胞化 |
|---|
| Outline of Research at the Start |
卵巣凍結は若年がん女性の妊孕性温存に応用され、融解移植後の生児獲得が報告されている。しかし、がん転移により凍結卵巣内に微小残存病変が存在する場合、移植により原疾患再発の可能性がある。そこで、再発回避のために、移植可能な人工的なマトリックスに単離した卵胞を導入して人工卵巣を作成し、移植する方法が提案されている。アルギン酸やフィブリンのような人工的な材料を用いて自然の臓器を模倣した人工卵巣が開発されている。一方で、ヒト卵巣組織を脱細胞化することで、微小残存病変を除去した人工卵巣が作成できることが報告された。本研究では、脱細胞化したヒト卵巣組織にマウス卵胞を導入してマウスに移植し、発生能を調べる。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
新たな妊孕性温存回復のための方法として脱細胞化卵巣組織を用いた人工卵巣の開発を計画した。ICRマウスの両側卵巣を摘出し、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS: Sodium Dodecyl Sulfate）による脱細胞処理とDNase処理を施した。細胞成分は除去され、細胞外マトリックス（ECM; Extracellular matrix）のみが保持された。これは、ICRマウスの脱細胞化卵巣組織が微小残存病変（MRD：Minimal Residual Disease）の除去および移植時の安全性向上に寄与し、卵巣再構築の足場として有用である可能性を示した。
次に、B6D2F1マウスから分離した卵胞を、脱細胞化した卵巣組織に導入し、マトリゲルまたはアルギン酸ナトリウムで包埋して再構築卵巣を作製した。そして、SCIDマウス5匹に対し、片側または両側の卵巣を摘出し、再構築卵巣またはC57BL/6-Tg（CAG-EGFP）マウスの全卵巣を同部位に移植した。移植14日後にPMSG投与し、2日後にhCGにより排卵を誘発した後、ICR♂マウスと交配させた。排卵誘発翌日にSCIDマウス4匹において腟栓を確認し、交配から17日後に合計15匹の産仔が得られた。そのうち4匹はC57BL/6-Tg（CAG-EGFP）マウスの卵巣由来であり、11匹はSCIDマウス由来の卵巣からの産仔であった。再構築卵巣を移植した側からは胎児は得られず、再構築卵巣からの生殖能力の回復は確認されなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
マウスへの再構築人工卵巣の正所性移植は高度な技術を要するため、比較的実施が容易とされる腎被膜下への異所性移植を試みた。しかし、再構築卵巣は脆弱であり、腎被膜下移植であっても技術的に困難であることが明らかとなった。
また、移植2日後に排卵誘発を行った場合には、対照群（正常卵巣移植群）でも産仔は得られなかった。しかし、移植2週間後に排卵誘発を実施した場合には、対照群で産仔獲得が可能となった。これは、卵巣移植後の生着と機能回復に一定期間が必要であることを示唆している。
本研究では、脱細胞化マウス卵巣に卵胞を再導入し、SCIDマウスへの移植後、自然交配による産仔獲得を目指した。しかし、現時点では再構築卵巣組織の生着や機能回復が不十分であり、妊娠成立には至っていない。このため、本技術の生殖機能再建への有効性を示すには、さらなる概念実証が必要であると考えられる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究では、再構築卵巣の生着率および卵胞発育能の向上を目指し、脱細胞化プロトコールおよび組織再構築法の改良を行う計画である。特に、卵巣間質細胞の導入が再構築卵巣の機能回復の鍵を握ると考えられる。異系マウスを用いた検討を予定しており、脱細胞化組織の特性を活かして、組織裁断機により細切した組織に異系由来の卵巣間質細胞を混合し、卵巣組織再構築の達成を確認する。これにより、同系での組織移入では困難であった、再構築卵巣由来の産仔が同系由来か異系由来かを識別することが可能となる。また、移植技術の洗練化および長期機能評価を通じて、最終的には再構築卵巣による産仔獲得の実現を目指す。
|
