Project/Area Number |
22K16847
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
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Research Institution | Fukuoka University |
Principal Investigator |
柴田 磨己 福岡大学, 医学部, 助教 (20816392)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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Keywords | microRNA / 着床不全 / NGS / モデルマウス / 脂肪幹細胞 / 脂肪組織由来幹細胞 / 次世代シーケンシング |
Outline of Research at the Start |
晩婚化の傾向が強くなってきた現代では、加速度的に不妊症治療が急務となっている。しかしながら、現在の不妊症最大の原因である、「受精卵が子宮内膜に着床しない」という着床不全問題に対しては未だ有効な治療方法が無い。本研究では、Small RNA-Seq、およびmRNA-Seという2種類の次世代シーケンシング解析を用いることで子宮内膜再生能力を制御するmicroRNA分子を特定する。このmicroRNA分子配列から不妊治療薬試作品となりうる人工核酸を作製し、その効果をin vitro、in vivoにて検証することで、安価かつ安全性、有効性の高い不妊治療薬開発の基盤確立、企業導出を目指す。
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Outline of Annual Research Achievements |
本研究は脂肪幹細胞上清に含まれる、子宮内膜着床不全を治癒するmicroRNAを同定することを目的とし、1) Small RNA-Seq解析、mRNA-Seq解析による子宮内膜再生microRNAの同定、2) ヒト子宮内膜間質細胞と子宮内膜菲薄化マウスを用いたmicroRNAの子宮内膜再生能評価、3) ボナック核酸の作製と子宮内膜菲薄化マウスに対する薬効、細胞内動態解析を実施する。 細胞は継代を重ねるごとに老化し、分化能力が低下する。マウス脂肪幹細胞もまた、継代を重ね、分化能力が低下するほど、子宮内膜再生能力が低下することが予測される。本年度は、高い分化能力を保持した3継代目、および分化能力が低下した20継代目におけるマウス脂肪幹細胞の上清をsmall RNA-Seq解析することで、3継代目の上清にて有意に発現上昇しているmicroRNAを10種程度同定することに成功した。また、子宮内膜菲薄化マウス作製のための最適なエタノール投与量を決定し、さらに、マウス子宮内膜のHE染色画像から子宮内膜の厚みを測定する方法を決定したことで、microRNAの子宮内膜再生効果を正確に検証する方法を確立した。 来年度以降は、モデルマウスの子宮組織をRNA-Seq解析し、その発現パターンと同定したmicroRNAの関係性を確認すると共に、実際に、同定したmicroRNAを子宮内膜菲薄化モデルマウスへ投与することで、子宮内膜の厚さ、および血管新生関連遺伝子の発現、受精卵の着床率を調べることで、子宮内膜再生効果を検証する。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度はマウス子宮を用いたRNA-Seq解析までを予定していたが、実施までには至らなかった。
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Strategy for Future Research Activity |
来年度は正常なマウス子宮組織と、内膜を菲薄化させたマウスの子宮組織を用いたRNA-Seq解析を実施する。さらに、同定されたmicroRNA候補を子宮内膜菲薄化モデルマウスに投与することで、子宮内膜再生能力の有無を子宮内膜の厚さ、血管新生関連遺伝子の発現、受精卵の着床率などから多面的に検証する。
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