miR-30/miR-210比を用いた潜在性子宮内膜症の診断に関する基礎研究

Research Project

Project/Area Number	22K16862
Research Category	Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
Allocation Type	Multi-year Fund
Review Section	Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
Research Institution	Oita University
Principal Investigator	青柳陽子大分大学, 医学部, 医員 (00883828)
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2025-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000) Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000) Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Keywords	子宮内膜症 / バイオマーカー / miR-210 / miR-30 / マイクロRNA
Outline of Research at the Start	子宮内膜症の現行の診断法（鏡視下や臨床診断）では、発症から診断までに約10年の遅延が生じる。本研究の学術的問いは「miR-30/miR-210 ratioは、潜在性子宮内膜症のバイオマーカーとなりうるか」である。我々は、ヒト正常子宮内膜間質細胞ではmiR-30が、子宮内膜症間質細胞ではmiR-210が高発現することを明らかにした。本研究では、miR-30およびmiR-210の機能解析を行い、子宮内膜症モデルマウスを用いて、線維化とmiR-30またはmiR-210の標的蛋白との相関を検証する。miR-30/miR-210 ratioで子宮内膜症の早期診断ができれば、早期の治療介入が期待できる。
Outline of Annual Research Achievements	本研究の目的は、子宮内膜症におけるmiR-30とmiR-210の役割（標的分子の発現検証、機能解析）を明らかにし、miR-30/miR-210 ratioが早期診断のバイオマーカーとなりうるかを検証することである。ヒト正常および子宮内膜症間質細胞を用いたmiR-30とmiR-210の発現解析を行った。正常子宮内膜間質細胞ではmiR-30a-5pが、卵巣子宮内膜症間質細胞ではmiR-210の発現が増強した。IPA（Ingenuity Pathway Analysis）を用いたパスウェイ解析を行い、miR-30とmiR-210の標的分子を抽出した。miR-132の標的分子として、Kruppel-like factor 9、paired-like homeodomain 1、tolloid-like 1、tolloid-like 2、period circadian clock 2、period circadian clock 3が抽出された。また、miR-210の標的分子として、protein tyrosine phosphatase, nonreceptor type 1、E2F transcription factor 3、growth hormone receptor、thymidine kinase 1が抽出された。PCR法を用いて、これらの標的分子の発現解析を行い、既存の報告と同様の結果となった。標的分子について、ウエスタンブロッティング法を用いた蛋白発現の検証中である。また、子宮内膜症マウスを用いた標的分子の発現解析の準備を進めている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 主任教授変更に伴う研究環境の再整備中であり、実施可能な実験手技ならびに試料で研究を継続した。
Strategy for Future Research Activity	正常および子宮内膜症間質細胞を用いた機能解析として、miR-30、miR-210、miR-30＋mR-210を強制発現させたヒト正常および子宮内膜症間質細胞を用いて、線維化、細胞増殖能、細胞死耐性を評価する。また、子宮内膜症マウスを用いた標的分子の発現解析の準備を進めている。