| Project/Area Number |
22K17188
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
|
|---|
| Research Institution | Sapporo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
畠中 柚衣 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (60815265)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
|
| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
|
|---|
| Keywords | 長鎖noncoding RNA / DLEU1 / 口腔がん / インターフェロンシグナル / インターフェロン応答 |
|---|
| Outline of Research at the Start |
応募者は、口腔がん細胞において高発現する長鎖noncoding RNA (lncRNA)としてDLEU1 (deleted in lymphocytic leukemia 1)を同定した。本研究は、口腔がんにおけるDLEU1の分子機能および臨床的意義を明らかにし、新たな治療法の開発につなげることを目的とする。そのために、(1) DLEU1が口腔がん細胞のIFNシグナルを活性化するメカニズムを明らかにする、(2) DLEU1によるヒストン修飾変化のメカニズムおよびその機能的意義を解明する、(3) DLEU1が腫瘍免疫に与える影響を解析し、治療への応用可能性を明らかにする。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
口腔がん細胞におけるDLEU1の分子機能を明らかにするため、口腔がん細胞株を用いた機能解析を行った。DLEU1をsiRNAによりノックダウンして、cell viabilityアッセイ、細胞周期アッセイ、アポトーシスアッセイを行った結果、細胞増殖の抑制、細胞周期停止、アポトーシスの誘導が認められた。逆にレンチウイルスベクターによるDLEU1の過剰発現は細胞増殖を促進した。
DELU1が遺伝子発現プロファイルおよびエピゲノムに与える影響を明らかにするため、DLEU1ノックダウン後に遺伝子発現マイクロアレイ解析、およびクロマチン免疫沈降シークエンス(ChIP-seq)によるヒストンH3リジン4トリメチル化(H3K4me3)と、ヒストンH3リジン27アセチル化(H3K27ac)の解析を行った。その結果、インターフェロン応答や免疫応答に関わる遺伝子の発現およびH3K27acが、DLEU1ノックダウンにより有意に低下することを明らかにした。IFIT1、IFITM1、IFI6など代表的なインターフェロン応答遺伝子を選択し、遺伝子発現を定量RT-PCR、H3K27acレベルをChIP-qPCRで検証した結果、DLEU1ノックダウンによる低下を確認した。逆にDLEU1の過剰発現により、IFITM1やOAS1などインターフェロン応答遺伝子の発現およびH3K27acレベルが上昇した。これらの結果からDLEU1が口腔がん細胞のインターフェロン応答を活性化することを明らかにした。
DLUE1ノックダウンにより発現低下するインターフェロン応答遺伝子の中から、IFITM1に着目して解析を行った。IFTM1が口腔がん臨床例において発現上昇していることを見出した。IFITM1のノックダウンは口腔がん細胞の増殖、遊走、浸潤を抑制した。これらの結果から、DLEU1がインターフェロン応答遺伝子の制御を介して腫瘍促進的に働くことが示された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
口腔がん細胞におけるDLEU1の分子機能を明らかにするため、トランスクリプトーム解析とエピゲノム解析を行い、DLEU1が口腔がん細胞のインターフェロン応答シグナルを活性化することを明らかにした。その結果を、DLEU1過剰発現系で検証した。DLEU1により制御を受けるインターフェロン応答遺伝子を抽出し、機能解析を行った。
|
| Strategy for Future Research Activity |
さらに複数の口腔がん細胞株を用いて、トランスクリプトーム・エピゲノムデータを収集する。それらのデータのバイオインフォマティクス解析を行い、DLEU1の分子機能の推測を行う。またDLEU1の下流標的遺伝子候補を同定し、口腔がん細胞を用いて機能解析を行う。
|
