TNF-αによる破骨細胞分化および歯の移動時のエピジェネティクス制御機構の解明
Project/Area Number |
22K17223
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 57070:Developmental dentistry-related
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
野口 隆弘 東北大学, 大学病院, 助教 (20907430)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
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Keywords | 破骨細胞 / TNF-α / 矯正学的歯の移動 / RANK / エピジェネティクス |
Outline of Research at the Start |
破骨細胞形成には、M-CSFとRANKLの2つのサイトカインに加え炎症性サイトカインであるTNF-αも重要な因子として認識されている。また、近年エピジェネティクスが細胞や組織の発生・分化の制御に必須の機構であることが明らかになっている。しかし、TNF-αが関与する破骨細胞形成と歯の移動メカニズムをエピジェネティクスの観点から明らかにした報告はまだない。ヒストンメチル化酵素SET7/9は TNF-αによる炎症性遺伝子発現への関与が示唆されている。本研究ではSET7/9によるヒストン修飾に注目し、破骨細胞分化および矯正学的歯の移動の分子メカニズムの解析を行う。
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Outline of Annual Research Achievements |
破骨細胞形成の際にRANKLとTNF-αが相乗的に作用することが報告されている。申請者らの研究でTNF-αを破骨細胞前駆細胞に作用させるとRANKLの受容体であるRANKの発現が増加することが明らかになっている。また、TNF-αは免疫反応で重要な転写因子NF-kBを活性化させることでRANK発現を促進することも見出している。一方、単球をTNF-αで刺激した際に、NF-kBはヒストンメチル化酵素であるSET7/9と結合して核内に移行し、ヒストンH3K4のメチル化を起こすことでヘテロクロマチンからユークロマチンへの移行を促し、炎症に関連する遺伝子の転写の活性化を行っていることが報告されている。本研究では、破骨細胞前駆細胞におけるTNF-αによるRANK発現の増強のメカニズムにSET7/9が及ぼす影響について解明することを目的とする。まず、マウス骨髄細胞から破骨細胞前駆細胞を培養し、タンパクを回収後、SET7/9の抗体を用いてウェスタンブロットを行うことで、破骨細胞前駆細胞中のSET7/9の発現を確認した。次に、破骨細胞前駆細胞のSET7/9をリポフェクション法によりノックダウンし、TNF-α刺激時のRANK発現に及ぼす影響をリアルタイムPCRにより解析した。結果、TNF-αにより増強されたRANK発現が、SET7/9のノックダウンにより減少することが明らかになった。また、近接ライゲーションアッセイによりSET7/9とNF-kBのサブユニットであるp65のタンパク質相互作用が見られた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
SET7/9とp65が破骨細胞前駆細胞中で複合体を形成していることを確認するための共免疫沈降実験の条件検討に時間を要しているため。
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Strategy for Future Research Activity |
破骨細胞前駆細胞に対するRANK遺伝子プロモーターのNF-kB結合領域の解明を行う。その後、TNF-α刺激によりNF-kBおよびSET7/9がRANK遺伝子発現領域に動員されるかをChIPアッセイにより解析する。また、NF-kBおよびSET7/9によるRANK遺伝子領域のヒストンメチル化制御の解明をChIPアッセイにより解析する。
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Report
(1 results)
Research Products
(2 results)