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生体膜ナノ構造の可視化と脂質網羅分析のための統合ナノ分析システム

Research Project

Project/Area Number 22K18950
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)

Allocation TypeMulti-year Fund
Review Section Medium-sized Section 28:Nano/micro science and related fields
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

川井 隆之  九州大学, 理学研究院, 准教授 (60738962)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 高橋 康史  名古屋大学, 工学研究科, 教授 (90624841)
Project Period (FY) 2022-06-30 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2023: ¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
Keywords生体膜マイクロドメイン / 走査型イオン伝導顕微鏡 / エレクトロスプレーイオン化 / 質量分析 / 固相抽出 / 生体膜ナノドメイン / 電気泳動 / 生体膜 / リピドーム分析 / ナノスケール分析
Outline of Research at the Start

生体膜の局所的ナノ構造を可視化し,構成する分子組成を明らかにするための「統合ナノ分析システム」を世界で初めて実現し,生体膜ナノ構造に基づく未知の生命原理や疾患の分子機序を明らかにするための技術基盤を構築する。生細胞膜のナノ構造を可視化できる走査型イオン伝導顕微鏡でナノドメインを捕捉して採取し,ナノキャピラリー電気泳動-質量分析で解析する統合ナノ分析システムを開発する。これにより,ナノドメインの時空間情報と脂質分子組成などの化学情報の両面から生体膜の実態解明を目指す。

Outline of Annual Research Achievements

生体膜では特定の脂質とタンパク質が自己組織化することでナノドメインが形成され,重要な生体膜機能を制御することが示唆されているが,内在性脂質を直接的に解析する分析手法が存在しなかった。そこで本研究ではナノニードルを用い,走査型イオン伝導顕微鏡 (SICM) により非標識で生体膜ナノドメインを可視化・採取し,その後ナノニードル内部でクロマトグラフィーや電気泳動によって試料の精製・分離を行い,最終的にナノエレクトロスプレーイオン化質量分析(nanoESI-MS) によって高感度・網羅的に脂質分析を行うシステムを開発する。ナノドメインの時空間情報と脂質分子組成などの化学情報の両方を取得することで,生体膜ナノドメインにおける生命現象を捉えられる統合ナノ分析システムを構築することを目標とする。
本年度は,昨年度に開発した炭素鎖修飾ニードルを用いた固相抽出-ナノエレクトロスプレーイオン化-質量分析法を用い,まず脂質標品を用いて定量再現性の評価を行った。得られたピーク面積を試料濃度に対してプロットしたところ,nMオーダーの感度と良好な線形性が得られた。続いて単一ジャイアントリポソームの解析を行ったところ,構成成分である脂質を感度よく検出することに成功した。最終的にマウス神経芽細胞腫Neuro2a細胞を用い,その神経突起部分と細胞体部分を区別して採取して解析を行ったところ,20種類以上の脂質を検出することに成功した。この中でホスファチジルコリンに注目して解析を行ったところ,神経突起部分より細胞体の方に多くの二重結合を含む脂質が観察された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

新たに開発した固相抽出ニードルデバイスにより定量的な微量分析系を確立し,細胞膜の局所から脂質の定量的分析を行うことに成功したことから,従来技術では解明できない分子プロファイルを得るという所定の目標を達成した。

Strategy for Future Research Activity

極めて微量な検体を分析するシステムであるため,本手法は現時点では再現性に改善の余地があり,このための最適化実験を推進する。改善された新プロトコルに沿って各種分析性能の評価,人工膜・細胞膜の解析を推進し,良好なデータが得られ次第論文投稿を行う。

Report

(2 results)
  • 2023 Research-status Report
  • 2022 Research-status Report
  • Research Products

    (16 results)

All 2024 2023 2022

All Journal Article (9 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 8 results,  Open Access: 3 results) Presentation (7 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 5 results)

  • [Journal Article] Terahertz-capillary electrophoresis (THz-CE) for direct detection of separated substances in solutions2024

    • Author(s)
      Kitagishi Keiko、Kawai Takayuki、Tonouchi Masayoshi、Serita Kazunori
    • Journal Title

      Optical Materials Express

      Volume: 14 Issue: 2 Pages: 472-472

    • DOI

      10.1364/ome.500594

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Gold nanoparticle-powered screening of membrane protein-specific lipids from complex lipid mixtures2024

    • Author(s)
      Wangamnuayporn Supakorn、Kinoshita Masanao、Kawai Takayuki、Matsumori Nobuaki
    • Journal Title

      Analytical Biochemistry

      Volume: 687 Pages: 115447-115447

    • DOI

      10.1016/j.ab.2023.115447

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] An innovative detection technique for capillary electrophoresis: Localized terahertz emission-time domain spectroscopy2023

    • Author(s)
      Kitagishi Keiko、Kawai Takayuki、Tonouchi Masayoshi、Serita Kazunori
    • Journal Title

      Journal of Chromatography A

      Volume: 1710 Pages: 464384-464384

    • DOI

      10.1016/j.chroma.2023.464384

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Unique applications of capillary electrophoresis2023

    • Author(s)
      Kawai Takayuki
    • Journal Title

      Analytical Sciences

      Volume: 39 Issue: 9 Pages: 1433-1434

    • DOI

      10.1007/s44211-023-00394-6

    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Journal Article] Correlative Analysis of Ion-Concentration Profile and Surface Nanoscale Topography Changes Using Operando Scanning Ion Conductance Microscopy2023

    • Author(s)
      Takahashi Yasufumi、Takamatsu Daiko、Korchev Yuri、Fukuma Takeshi
    • Journal Title

      JACS Au

      Volume: 3 Issue: 4 Pages: 1089-1099

    • DOI

      10.1021/jacsau.2c00677

    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Topographical evaluation of human mesenchymal stem cells during osteogenic differentiation using scanning ion conductance microscopy2023

    • Author(s)
      Nozawa Kota、Zhang Xuyang、Nakamura Takuo、Nashimoto Yuji、Takahashi Yasufumi、Ino Kosuke、Shiku Hitoshi
    • Journal Title

      Electrochimica Acta

      Volume: 449 Pages: 142192-142192

    • DOI

      10.1016/j.electacta.2023.142192

    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Surface morphology live-cell imaging reveals how macropinocytosis inhibitors affect membrane dynamics2023

    • Author(s)
      Ida Hiroki、Taira Noriko、Azuma Koichi、Kumatani Akichika、Akishiba Misao、Futaki Shiroh、Takahashi Yasufumi、Shiku Hitoshi
    • Journal Title

      Electrochimica Acta

      Volume: 441 Pages: 141783-141783

    • DOI

      10.1016/j.electacta.2022.141783

    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Quantitative analysis of drug distribution in heterogeneous tissues using dual‐stacking capillary electrophoresis-mass spectrometry2022

    • Author(s)
      Koganemaru Shigehiro、Kawai Takayuki、Fuchigami Hirobumi、Maeda Naoyuki、Koyama Kumiko、Kuboki Yasutoshi、Mukohara Toru、Doi Toshihiko、Yasunaga Masahiro
    • Journal Title

      British Journal of Pharmacology

      Volume: 180 Issue: 6 Pages: 762-774

    • DOI

      10.1111/bph.15988

    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] A noncanonical endocytic pathway is involved in the internalization of 3 μm polystyrene beads into HeLa cells2022

    • Author(s)
      Hirose Hisaaki、Maekawa Masashi、Ida Hiroki、Kuriyama Masashi、Takahashi Yasufumi、Futaki Shiroh
    • Journal Title

      Biomaterials Science

      Volume: 10 Issue: 24 Pages: 7093-7102

    • DOI

      10.1039/d2bm01353c

    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 超高感度キャピラリー電気泳動技術を駆使した微量バイオ分析法の開発2024

    • Author(s)
      川井 隆之
    • Organizer
      日本化学会 第104春季年会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] サブセルラー質量分析技術が切り拓く生体膜研究2023

    • Author(s)
      川井 隆之
    • Organizer
      日本膜学会第45年会・膜シンポジウム2023合同大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] 超高感度CE-MS分析法による脳分子探査2023

    • Author(s)
      川井 隆之
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Ultra-sensitive Bioanalysis by Dual-Stacking Capillary Electrophoresis2023

    • Author(s)
      Takayuki Kawai
    • Organizer
      19th Asia-Pacific International Symposium on Microscale Separations and Analysis 2023 (APCE 2023)
    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] LC/CE二次元分離に基づく超高感度・絶対定量グライコーム解析法の開発2023

    • Author(s)
      川井 隆之
    • Organizer
      第74回日本電気泳動学会学術大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] 生体膜局所の定量的脂質プロファイリングに向けたマイクロニードル固相抽出-質量分析法の開発2023

    • Author(s)
      久保田 颯,伊藤 美由紀,今田 皇緑,劉 晨晨,鳥飼 浩平,木下 祥尚,松森 信明,川井 隆之
    • Organizer
      日本化学会 第103春季年会
    • Related Report
      2022 Research-status Report
  • [Presentation] 生体膜マイクロドメインを標的とした微量脂質分析法の開発2022

    • Author(s)
      久保田 颯,伊藤 美由紀,今田 皇緑,劉 晨晨,木下 祥尚,松森 信明,川井 隆之
    • Organizer
      日本分析化学会 第71年会
    • Related Report
      2022 Research-status Report

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Published: 2022-07-05   Modified: 2024-12-25  

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