| Project/Area Number |
22K18952
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Medium-sized Section 28:Nano/micro science and related fields
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| Research Institution | University of Hyogo |
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Principal Investigator |
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 雅登 兵庫県立大学, 理学研究科, 准教授 (60574796)
湊元 幹太 三重大学, 工学研究科, 教授 (80362359)
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| Project Period (FY) |
2022-06-30 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2023: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Fiscal Year 2022: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
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| Keywords | 誘電泳動 / 細胞融合 / 電気パルス / ハイブリドーマ |
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| Outline of Research at the Start |
正の誘電泳動を利用してマイクロウェルアレイ内に，B細胞（直径7 μm）とミエローマ細胞（直径15 μm）を位置制御して配向した細胞ペアを作製する．ウェル内に左右非対称のパルス電場を形成し，小細胞に強電場を大細胞に弱電場を印加し，サイズの異なる細胞の融合効率を大幅に向上させる．形成したハイブリドーマから分泌される抗体をウェル底面に固定化した抗原により捕捉し，抗体産生能を有するハイブリドーマをスクリーニングする．高性能細胞を選択的な負の誘電泳動によりウェル外へと放出・回収する．回収した細胞を培養することにより，限界希釈を省略して容易で迅速にモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを取得する．
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| Outline of Final Research Achievements |
In this study, we developed a series of techniques for pair array formation of antibody-producing B cells and myeloma cells with permanent proliferative potential, hybridoma generation by electric pulse fusion, evaluation of antibody-producing potential of arrayed cells, and selective collection of cells with high ability. Heterologous cell pairs were rapidly formed using positive dielectrophoresis with an electrode device with microwell array, and the heterologous cells were fused by electric field pulses. Antibodies secreted from the arrayed cells were captured to the antigen immobilized on the cell surface. Highly secreted cells were selectively retrieved from the wells using negative dielectrophoresis. This series of techniques developed in this work will lead to improve fusion efficiency and to develop a hybridoma production method that eliminates screening by limiting dilution.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
現在，モノクローナル抗体の作出は，免疫化マウスから摘出した脾臓中のB細胞とミエローマ細胞の融合によるハイブリドーマ法に依存している．しかし，抗体産生B細胞の存在率および融合効率は極めて低く，わずかに形成された抗体産生ハイブリドーマを長期間かけてスクリーニングする必要がある．本研究では，ウェルアレイに形成した異種細胞ペアの電気パルス融合と抗体産生細胞の選択的回収を達成し，高効率融合とスクリーニング不要の可能性を示した．将来的に，高効率化は末梢血中のB細胞を対象としたハイブリドーマの作製に直結するため，ヒトへの応用展開による完全ヒト抗体の取得から分子標的治療薬（抗体医薬）開発に貢献できる．
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