脱分化型脂肪肉腫におけるテロメア維持機構：腫瘍進展機構の解明と予後予測への応用

• Project/Area Number: 22K20767
• Research Category: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: 0803:Pathology, infection/immunology, and related fields
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 國枝 純子 東京医科歯科大学, 東京医科歯科大学病院, 助教 (60963428)
• Project Period (FY): 2022-08-31 – 2025-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2022)
• Budget Amount: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000); Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: 脱分化型脂肪肉腫 / テロメア維持機構 / 脂肪肉腫 / テロメア

Outline of Research at the Start

脱分化型脂肪肉腫は、高分化型脂肪肉腫を前駆病変とする悪性腫瘍で、MDM2遺伝子の増幅を特徴とする。一般的に複雑な染色体異常を示す肉腫では、テロメア維持機構としてテロメラーゼ活性化よりもALT(テロメラーゼ非依存性テロメア伸長)が高頻度に認められるとされるが、詳細はいまだに解明されていない。本研究では、脱分化型脂肪肉腫の症例を使用し、テロメア維持機構、染色体異常の複雑性について検証する。これらと臨床病理学的特徴との関係を解析することで、脱分化型脂肪肉腫の腫瘍進展について、より包括的に理解することができ、予後予測に有用な情報を得られると考える。

Outline of Annual Research Achievements

がん細胞の無限増殖性に重要な役割を果たすテロメア維持機構には、テロメラーゼ活性化と、Alternative lengthening of telomeres (ALT; テロメラーゼ非依存性テロメア伸長)の2種類が知られている。一般的に複雑な染色体異常を示す肉腫では、テロメア維持機構としてテロメラーゼ活性化よりもALTが高頻度に認められる。脱分化型脂肪肉腫においてもALTが多いとされるが、詳細はいまだに解明されていない。脱分化型脂肪肉腫におけるテロメア維持機構の詳細をテロメラーゼ活性化とALTの両方から解析し、染色体異常の複雑性や、予後や組織像を含めた臨床病理学的項目との関連について検討する。そこから脱分化型脂肪肉腫の腫瘍進展について、より包括的に理解することができ、予後予測に有用な情報を得られることを目的とする。
まずは脱分化型脂肪肉腫36検体において、予備検討を行ったところ、ALTはこれまでの報告と同程度の頻度で認められた(31%) 。また、TERTプロモーター点変異は認められなかったのにも関わらず、TERT mRNAの発現が認められた症例や、FISH法にてTERTの増幅が認められた症例があり、いずれもALT陰性症例であった。さらに解析を進めるため、症例選定として、先行研究で収集した36例に加えて、脱分化型脂肪肉腫のFFPE標本が利用可能かつ5年以上の長期予後が判明している症例を中心に収集しデータベースを作成した（約50例）。ここで産前産後の休暇又は育児休業の取得に伴い、令和4年12月－令和5年4月まで中断を要した。今後は、FFPE検体からHE標本を作製し、FNCLCC grade等の病理組織学的特徴を評価する。また代表的な症例を抽出してテロメア維持機構の解析や全エクソンシークエンス解析でコピー数の異常を含めて遺伝子異常を検索する。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

申請者は令和4年12月から令和5年4月まで産前産後および育児休暇を取得しており，その間研究は休止していたため，当初の研究計画よりやや遅れがでている．補助事業期間延長申請は提出中であり，研究期間の延長によって研究の遅れを取り戻す予定である．

Strategy for Future Research Activity

症例の抽出とtissue microarrayの作製後、脱分化型脂肪肉腫に特徴的なMDM2遺伝子増幅を確認する(FISH)。そして、テロメア維持機構の解析としてTERT の再構成, 増幅の有無(TERT split FISH, TERT copy number FISH; TMA を使用)、テロメラーゼ非依存性テロメア伸長 (ALT)の有無の判定(telomere specific FISH; TMA を使用)、TERTプロモーター変異の有無(DNAシークエンス)、TERT mRNA発現量の定量(リアルタイムPCR)を行う。そしてALTとTERT異常の有無で層別化し、代表的な症例を抽出して全エクソンシークエンス解析でコピー数の異常を含めて遺伝子異常を検索する。