神経堤幹細胞の多分化能を利用した新しい唇顎口蓋裂への治療方法の基盤構築

Research Project

Project/Area Number	22K21023
Research Category	Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
Allocation Type	Multi-year Fund
Review Section	0907:Oral science and related fields
Research Institution	Showa University
Principal Investigator	瀧澤秀臣昭和大学, 歯学部, 助教 (70963023)
Project Period (FY)	2022-08-31 – 2024-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000) Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Keywords	神経堤由来細胞 / 神経堤幹細胞
Outline of Research at the Start	神経堤細胞は高い多分化能をもつ幹細胞集団であり、胚発生過程において頭蓋顎顔面などの様々な細胞や組織に分化する。近年、成体でも幹細胞マーカーを発現する神経堤由来細胞の存在が確認されたが、その分布や機能の詳細は未解明である。成体の神経堤由来細胞が多分化能を維持しているならば、口腔の創傷治癒や組織再生への応用が期待できるため、その多分化能を応用した生体移植材料としての基盤を構築する。
Outline of Annual Research Achievements	１.神経堤由来細胞の多分化能解析(in vitro) 成体にて容易に採取が行える神経堤由来細胞のソースとして毛包と口蓋粘膜の２箇所が検討される。そのため、P0-EGFPマウスより採取したEGFP陽性の毛包由来神経堤細胞、口蓋粘膜由来神経堤由来細胞を幹細胞増殖培地で増殖させた。それぞれの細胞の幹細胞としての性質をフローサイトメトリーで解析を行ったところ、両者とも幹細胞であることが認められた。幹細胞培地で培養増殖させた毛包由来の神経堤由来細胞をケラチノサイトおよび骨芽細胞へと分化誘導させた。骨芽細胞への分化誘導は計画した培養日数までの培養が行えず解析できていない。ケラチノサイト分化誘導培地での培養７日目、１４日目にそれぞれの細胞の性質の確認を蛍光免疫染色およびqPCRにて解析した。蛍光免疫染色ではKeratin 13、Keratin 14陽性の細胞が培養７日目および１４日目にて認められた。qPCRでは培養１４日目にてKeratin13およびKeratin14遺伝子発現の傾向が認められたが、信頼性のおける十分な結果は得られていない。ケラチノサイトへの分化誘導に関し、再度検証実験を行い十分な確認を行う。２.移植用粘膜細胞シートおよび骨補填剤の作製神経堤由来細胞のソースおよびケラチノサイト、骨芽細胞への分化誘導の検証が不十分なため、移植用組織の作製へ着手できていない。今後、毛包由来神経堤由来細胞にてケラチノサイトへの分化が検証され次第、移植用組織の作製に着手する。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 培養実験にて解析している結果が予想よりスムーズに出ていないため、１つ１つの工程での検証等に時間を要している。
Strategy for Future Research Activity	今後臨床応用することを考え、細胞の採取のしやすさから毛包由来の神経堤由来細胞を選択しているが、口蓋粘膜由来の神経堤由来細胞にて、粘膜および骨への移植用組織の作製に着手する。