口腔癌患者由来・癌関連線維芽細胞、機能性RNA解析に基づく治療標的分子の 探索

• Project/Area Number: 22K21052
• Research Category: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: 0907:Oral science and related fields
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 駒 綾香 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任助教 (60963098)
• Project Period (FY): 2022-08-31 – 2024-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2023)
• Budget Amount: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000); Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: 口腔扁平上皮癌 / 癌関連線維芽細胞 / 機能性RNA / マイクロRNA

Outline of Research at the Start

OSCC手術検体からCAFの初代培養法を確立し、複数のOSCC-CAFを樹立、更にRNAシークエンスによりOSCC-CAFマイクロRNA発現プロファイルを作成し、OSCC、OSCC-CAF、正常線維芽細胞の比較から、OSCC-CAFに特異的な発現を示すマイクロRNAを明らかにした。本研究ではOSCC-CAFに特異的なマイクロRNAを、OSCC細胞株または線維芽細胞株に核酸導入し、これらマイクロRNAの機能解析と制御する分子ネットワークの探索を立案した。OSCCの悪性化に関わる分子経路が明らかになれば、これら経路を遮断する分子の探索（ドラッグリポジショニング）に繋がると思われる。

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、OSCC手術検体からCAFの初代培養法を確立し、複数のOSCC-CAFを樹立した。RNAシークエンス解析によりOSCC-CAFマイクロRNA発現プロファイルを作成し、OSCC、OSCC-CAF、正常線維芽細胞の比較から、OSCC-CAFに特異的な発現を示すマイクロRNAを明らかにした。さらに、その機能解析とOSCC細胞の悪性化獲得に関与する分子ネットワークの探索を目的とした。OSCC手術検体から初代培養を行い、蛍光免疫染色法にてαSMA、FAP、vimentinを用いて解析し、単離した細胞は線維芽細胞（コントロール）・CAFであることを確認した。それぞれの細胞（線維芽細胞・CAF)から、total RNAを抽出しRNAシークエンス解析を行った。RNAシークエンス解析結果から、マイクロRNA137とマイクロRNA181に着目し、OSCC細胞株（Sa3、SAS）に対し核酸導入を行い、機能解析（増殖能、遊走能、浸潤能）を行った。機能解析の結果より、マイクロRNA181はOSCCの悪性化獲得へ関与している可能性が示唆された。