Full-length dystrophin restoration by in vivo RNA editing via a minidCas13X.1 conjugated ADAR
| Project/Area Number |
22KF0410
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| Project/Area Number (Other) |
22F22414 (2022)
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| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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| Allocation Type | Multi-year Fund (2023)
Single-year Grants (2022) |
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| Section | 外国 |
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| Review Section |
Basic Section 52020:Neurology-related
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| Research Institution | National Center of Neurology and Psychiatry |
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Principal Investigator |
青木 吉嗣 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所 遺伝子疾患治療研究部, 部長 (80534172)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
SAIFULLAH 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所 遺伝子疾患治療研究部, 外国人特別研究員
SAIFULLAH 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所 遺伝子疾患治療研究部, 外国人特別研究員
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| Project Period (FY) |
2023-03-08 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2024: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2022: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
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| Keywords | RNA編集 / Duchenne型筋ジスト ロフィー |
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| Outline of Research at the Start |
RNA編集はゲノム編集と異なり、ゲノムに対するオフターゲット変異挿入のリスクが無いことから、DMD遺伝子変異が原因のDuchenne型筋ジストロフィーの新規治療法として期待されている。本研究では、細胞およびマウスを対象に、DMD遺伝子のナンセンス変異を新規mini dCas 13X.1-ADAR1システムを用いたRNA編集により修復し、マウス骨格筋において全長ジストロフィンの発現を回復させることを目的とする。マウス骨格筋におけるRNA編集効率やジストロフィン発現レベルの評価に加えて、安全性についても評価する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
RNA編集はゲノム編集と異なり、ゲノムに対するオフターゲット変異挿入のリスクが無いことから、DMD遺伝子変異が原因のDuchenne型筋ジスト
ロフィーの新規治療法として期待されている。本研究では、細胞およびマウスを対象に、DMD遺伝子のナンセンス変異を新規mini dCas 13X.1-A
DAR1システムを用いたRNA編集により修復し、マウス骨格筋において全長ジストロフィンの発現を回復させることを目的とする。マウス骨格筋
におけるRNA編集効率やジストロフィン発現レベルの評価に加えて、安全性についても評価する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
特段の支障なく、計画通りに研究を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
ADAR1, ADAR2, and CRISPR-Cas 13X.1 plasmids will be ordered from Addgene. The
plasmid cloning will be done afterwards. An in vitro study using myotubes from DMD model mdx mice will be conducted to obtain a proof of concept. The restoration of full-length dystrophin protein will be confirmed at mRNA and protein levels. The Sanger sequencing for mRNA base editing, Immunofluorescence for dystrophin protein expression, and western blot for full-length protein expression will be considered as restoration validity tests. A suitable protocol for effective RNA editing will be optimized by exploring the following experiments: screening guide RNAs, titration of vector, screening editor enzyme, screening linker between the Editor and Cas13 protein, and off-target effect using RNA seq.
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Report
(1 results)
Research Products
(3 results)
