精巣腫瘍における生殖幹細胞発現遺伝子ＤＤＸ１の個体での機能解析

• Project/Area Number: 23592356
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Urology
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• Principal Investigator: 田中 貴代子 公益財団法人東京都医学総合研究所, 生体分子先端研究分野, 主席研究員 (40124474)
• Project Period (FY): 2011 – 2013
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥5,200,000 (Direct Cost: ¥4,000,000、Indirect Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2013: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2012: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2011: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
• Keywords: DDX1 / 精巣腫瘍 / トランスジェニック / ノックアウト / 免疫組織染色

Research Abstract

CAGプロモータ下流にloxP- Neomycin-loxP配列、Ddx1遺伝子を挿入したコンストラクトをマイクロインジェクションし、2種のトランスジェニックマウスの系統を樹立した。作出した２系統のトランスジェニックマウスと精巣特異的にCreを発現するNurogenin3-Creトランスジェニックマウスと交配した。CreリコンビナーゼによりNeomycin が除去され，CAGプロモーター下流にDdx1が挿入された個体について4 -12ヶ月の精巣を摘出し、トランスジェニックマウスとコントロールの精巣重量を比較したが，２系統共に特に目立った差は認められなかった。定量的PCRを用いた生後4-12ヶ月の精巣のDdx1の発現量はコントロールに比べ約２倍に亢進していた。そこで、摘出した精巣を固定、包埋後パラフィン切片を作成し、免疫組織染色によりDdx1の発現、分布を調べた。トランスジェニックマウス精巣では、GATA1を発現するセルトリ細胞は精細管周辺部に分布し、異常はみられなかったが、Ddx1発現細胞は精細管周辺部だけにとどまらず内腔方向に異常増殖している精細管も存在した。しかし、精子形成過程における大きな異常は検出できなかった。そこで，発生初期に全身でCre を発現する CAG-Creマウスとの交配により、CAG-Cre―Ddx1個体を得た。今後、発生段階を追って解析することにより精子形成過程への影響を調べる予定である。また、ノックアウトマウスについては、新たに生殖系列に伝播したキメラマウスを作出した。現在、Floxマウスまで作成が進んでいる。ホモ接合型のマウスが出来次第、精子形成過程における野生型との違いについて、精巣切片を作製して繊細に解析することと，RNA及びタンパクレベルでの発現を調べる予定である。

Research Products

• [Journal Article] Tumor suppressive function of PTPN23 in testicular germ cell tumors is lost upon overexpression of miR-142-3p (2013)
  • Author(s): Kiyoko Tanaka
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry Volume: - Issue: 33 Pages: 23990-23999
  • DOI: 10.1074/jbc.m113.478891
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] DDX1 (DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp) box poly-peptide 1) (2011)
  • Author(s): Takahiko Hara, Kiyoko Tanaka
  • Journal Title: Atlas Genet Cytogenet Oncol Haematol Volume: 15 Issue: 3 Pages: 259-261
  • DOI: 10.4267/2042/44979
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Tumor suppressor function of PTPN23 in testicular germ cell tumors (2012)
  • Author(s): Kiyoko Tanaka
  • Organizer: 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] miR-142-3p is a potential prognostic biomarker for testicular germ cell tumors (2012)
  • Author(s): Kiyoko Tanaka
  • Organizer: World Cancer Congress
  • Place of Presentation: montreal, CANADA