in vitro翻訳後修飾導入による新規自己抗体同定法の確立

• Project/Area Number: 23659311
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Laboratory medicine
• Research Institution: St. Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 加藤 智啓 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (80233807)
• Project Period (FY): 2011
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000); Fiscal Year 2012: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2011: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
• Keywords: 翻訳後修飾 / 自己抗原 / シトルリン化 / 質量分析

Research Abstract

自己抗体は検査医学研究の主要対象のひとつであるが、多くの自己抗体検査は抗原の翻訳後修飾という点は考慮していない。最近、シトルリン化ペプチドに対する自己抗体が関節リウマチに特異性が高いなど、抗原の翻訳後修飾の重要性が明らかになりつつある。本研究では、蛋白質の翻訳後修飾を認識する自己抗体の汎用的同定法を確立する。その際、従来法と異なり、in vitroで様々な翻訳後修飾を導入し、それを用いて自己抗体をスクリーニングすることで、効率良く目的を達成する。本年度の結果は以下の通りである。すなわちJurkat細胞からの抽出蛋白質をアルギニンデイミナーゼを用いてシトルリン化した。シトルリン化した抽出蛋白質と無処理の抽出蛋白質をそれぞれ2次元電気泳動で展開し、関節リウマチ患者血清によるウエスタンブロッティングで、シトルリン化パネルでのみ陽性となる蛋白質スポットをスクリーニングしたところ、シトルリン化依存性自己抗原候補スポットを複数個検出し、そのうち5種の自己抗原をMALDI-TOF-TOF-MS質量分析により同定した。さらに、組み換えタンパク質を作成し、シトルリン化ののちELISA法によりシトルリン化依存性を確認した。そのうちのひとつはアデノシンデナミナーゼで、抗炎症作用のあるアデノシンを減少させる酵素であった。診断マーカー候補になると共に、病態論的にも興味深いもので、現在論文として公表準備中である。また、アセチル化についても同様の解析法の確立することの検討を開始した。

Research Products

• [Journal Article] A novel anti-peroxiredoxin autoantibodyinpatients with Kawasaki disease. (2012)
  • Author(s): Fujieda M, Karasawa R, Takasugi H,Yamamoto M, Kataoka K, Yudoh K, KatoT, Ozaki S, Wakiguchi H.
  • Journal Title: Microbiology andImmunology. Volume: 56 Issue: 1 Pages: 56-61
  • DOI: 10.1111/j.1348-0421.2011.00393.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Proteomic analysis of bone marrow-adherent cells in rheumatoid arthritis and osteoarthritis. (2012)
  • Author(s): Kamada T, et al.
  • Journal Title: International Journal of Rheumatic Diseases Volume: 15 Issue: 2 Pages: 169-178
  • DOI: 10.1111/j.1756-185x.2012.01702.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] AC13, a C-Terminal fragment of apolipoprotein A-I, Is a candidate biomarker for microscopic polyangiitis (2011)
  • Author(s): Takakuwa Y., Ozaki S., et al
  • Journal Title: Arthritis & Rheumatis. Volume: 63(11) Issue: 11 Pages: 3613-3624
  • DOI: 10.1002/art.30560
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Increased expression of S100 calcium binding protein A8 in GM-CSF-stimulated neutrophils leads to the increased exptessions of IL-8 and IL-16 (2011)
  • Author(s): Katano M, et al
  • Journal Title: Clin Exp Rheumatol Volume: 29(5) Pages: 768-775
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Arthritogenecity of anneixin7 revealed by phosphoproteomics of rheumatoid synoviocytes (2011)
  • Author(s): Matsuo K, et al
  • Journal Title: Ann Rheum Dis Volume: 70 Pages: 1489-1495
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Anti-endothelial cell antibodies (AECA) in patients with systemic vasculitis : our research using proteomics (2011)
  • Author(s): Karasawa R, et al
  • Journal Title: Expert Opin Biol Ther Volume: 11 Pages: 77-87
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 抗RNP抗体の対応抗原snRNP68kの翻訳後修飾の解析 (2011)
  • Author(s): 永井宏平, 他7名
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] 関節リウマチ関連因子Anx7の解析 (2011)
  • Author(s): 有戸光美, 他11名
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] 「アセチル化」プロテオミクスによる関節リウマチ関連分子の探索 (2011)
  • Author(s): 有戸光美, 他6名
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] MPO-AMCAの対応抗原の翻訳後修飾の検討 (2011)
  • Author(s): 内田貞輔, 7名
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] Proteomic analysis of bone marrow-derived adheret cells in RA and OA (2011)
  • Author(s): Kamada T, et al
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] Proteomic analysis of peropheral blood monouclear cells from Bechet's desease (2011)
  • Author(s): Yoshioka T, et al
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] Comprehensive analyses of serum peptides in microscopic polyangiitis (2011)
  • Author(s): Takakuwa Y, et al
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] Proteome analysis of serum peptide related to the onset of arthritis of CIA rat (2011)
  • Author(s): Mitsui H, et al
  • Organizer: 第55回日本リウマチ学会総会・学術集会、第20回国際リウマチシンポジウム
  • Place of Presentation: 神戸ポートピアホテル、神戸国際会議場、神戸国際展示場(兵庫県)
• [Presentation] 関節リウマチにおける糖タンパク質の糖鎖異常 (2011)
  • Author(s): 佐藤利行, 他
  • Organizer: 日本プロテオーム学会2011年大会、日本ヒトプロテオーム機構第9回大会
  • Place of Presentation: 朱鷺メッセ(新潟県)
• [Presentation] Screening of glycoproteins with altered glycans in rheumatoid arthritis (2011)
  • Author(s): Sato T, et al
  • Organizer: HUPO 2011
  • Place of Presentation: ジュネーブ(スイス)
• [Presentation] Analysis of phosphorylation status of a disease-specific isoform of a U1 small nuclear ribonucleoprotein 68k subunit, a major antigen for anti-RNP autoantibodies (2011)
  • Author(s): Nagai K, et al
  • Organizer: HUPO 2011
  • Place of Presentation: ジュネーブ(スイス)