新規非翻訳RNAのクローニングとグルタミン酸レセプター遺伝子への影響に関する研究

• Project/Area Number: 23791174
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Pediatrics
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 粟野 宏之 神戸大学, 医学研究科, 特命助教 (30437470)
• Project Period (FY): 2011 – 2012
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000); Fiscal Year 2012: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2011: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
• Keywords: 非翻訳RNA / 国際情報交流

Research Abstract

我々はこれまでジストロフィン遺伝子のエクソン配列内に挿入された変異配列の解析から新規非翻訳RNAを同定した。この研究は新規非翻訳RNAのクローニングと機能解析を行うものである。
H23年度の研究で、非翻訳RNAの全長が452塩基であることを同定した。非翻訳RNAが他の遺伝子に影響を与える種類のものであるならば細胞内の局在は核内である。よって、当該非翻訳RNAの細胞内の局在を検討するために、HeLa細胞の核抽出液をもちいてRT-PCRをおこなった。いくつかのHeLa細胞の株を用いて3回検討したが、増幅産物を得られなかった。よってHeLa細胞においては当該非翻訳RNAは核内の存在しないことが明らかになった。次にHeLa細胞が実験に適切でないと考えたため、当該非翻訳RNAが強く発現している臓器を検索した。臓器特異性、発生の段階の特異性を検討するために、ヒト胎児組織、ヒト組織の全RNAを用いてRT-PCRを行った。その結果、胎児期では大脳のみに発現を認め、臓器別には大脳、甲状腺、胎盤、精巣、骨格筋、前頭葉、小脳、大脳皮質において発現を認めた。当該非翻訳RNAは脳においてのみ胎児期から成人期にかけ発現していたため、脳の形成や発達、機能獲得や維持に関連している可能性が考えられた。ヒト脳培養細胞は入手困難であるため、マウス脳cDNAを用い検討したところ、非常に弱い発現しか認めずマウス脳は適切な標本でないことが判明した。次に神経系の悪性腫瘍である神経芽細胞腫を用いて発現の検討をおこなったところ、発現を認めた。さらに、当該配列の種を超えたゲノム上の保存性を調べるためにオラウータン、チンパンジー、ゴリラのDNA上の配列を検討したところ、それぞれ962%、99.1%、99.5%と高度に配列が保存されていたためこれらのヒト科の動物において重要な機能を有している可能性が示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Categorization of 77 dystrophin exons into 5 groups by a decision tree using indexes of splicing regulatory factors as decision markers (2012)
  • Author(s): Malueka RG, Takaoka Y, Yagi M, Awano H, et al.
  • Journal Title: BMC Genet Volume: 31 Pages: 13-23
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pathogenic orphan transduction created by a nonreference LINE-1 retrotransposon (2012)
  • Author(s): Solyom S, Ewing AD, Hancks DC, Takeshima Y, Awano H, et al.
  • Journal Title: Hum Muta. Volume: 33 Pages: 369-71
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A G-to-T transversion at the splice acceptor site of dystrophin exon 14 shows multiple splicing outcomes that are not exemplified by transition mutations. (2012)
  • Author(s): Ota M, Takeshima Y, Nishida A, Awano H, et al.
  • Journal Title: Genet Test Mol Biomarkers Volume: 16 Pages: 3-8
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A patient with mitochondrial trifunctional protein deficiency due to the mutations in the HADHB gene showed recurrent myalgia since early childhood and was diagnosed in adolescence. (2011)
  • Author(s): Yagi M, Lee T., Awano H, Tsuji M, et al.
  • Journal Title: Mol Genet Metab. Volume: 104 Pages: 556-9
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Antisense oligonucleotide induced dystrophin exon 45 skipping at a low half-maximal effective concentration in a cell-free splicing system. (2011)
  • Author(s): Malueka RG, Yagi M, Awano H, Lee T, et al.
  • Journal Title: Nucleic Acid Ther. Volume: 21 Pages: 347-53
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 非侵襲的陽圧換気療法と器械による咳介助を活用し気管内挿管から離脱した脊髄性筋委縮症1型 (2011)
  • Author(s): 粟野宏之
  • Journal Title: 日本小児科学会雑誌 Volume: 115 Pages: 1451-1455
  • Peer Reviewed
• [Presentation] (1) Dystrophin gene mutations in three dystrophynopathy patients with severe cardiomyopathy. (2012)
  • Author(s): Hiroyuki Awano
  • Organizer: Pediatric Academic Societies annual meeting
  • Place of Presentation: Boston
  • Year and Date: 2012-04-29
• [Presentation] Dystrophin gene mutations in three dystrophinopathy patients with severe cardiomyopathy (2012)
  • Author(s): HIROYUKI AWANO
  • Organizer: Pediatric Academic Sociieties
  • Place of Presentation: Boston
• [Presentation] MLPA法を用いたジストロフィン遺伝子解析のピットフォール (2011)
  • Author(s): 粟野宏之
  • Organizer: 日本人類遺伝学会
  • Place of Presentation: 幕張メッセ
• [Presentation] 左室内径短縮率をもちいたDuchenne型筋ジストロフィーの小児期における心機能の検討 (2011)
  • Author(s): 粟野宏之
  • Organizer: 日本小児神経学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜