がん幹細胞抑制型腫瘍溶解性ウイルスを用いた抗癌化学併用療法の開発

• Project/Area Number: 23791493
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: General surgery
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 辻 俊明 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (20549737)
• Project Period (FY): 2011
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000); Fiscal Year 2013: ¥520,000 (Direct Cost: ¥400,000、Indirect Cost: ¥120,000); Fiscal Year 2012: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000); Fiscal Year 2011: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: 腫瘍溶解性ウイルス / がん幹細胞 / 抗癌化学療法 / 遺伝子発現抑制

Research Abstract

胃癌細胞株MKN28、MKN45、MKN74、MKN1、TMK-1、KatoIII、AZ521、OCUM-1を培養後、回収して表面マーカーCD24、CD44、CD133、CD166、SSEA-1、SSEA-4の蛍光標識抗体およびフローサイトメトリー法およびセルソーティングにて腎癌幹細胞表面マーカーの解析を行った。また、胃癌手術症例からの胃癌組織をサンプルとして同様にフローサイトメトリー法およびセルソーティングによる解析を予定していたが、腫瘍細胞のみの単離が困難で行えなかった。表面マーカーによるセルソーティングで得られた胃癌細胞株をヒト組換え20ng/mlのEGFおよび10ng/mlのbFGF存在下にて培養を行い、細胞生存率をトリパンブルーで測定し、4-5週間後に光学顕微鏡でspheroid colony formationがあるものを自己複製能のある胃癌幹細胞マーカーの候補と考えた。続いて8-12週齢のSCIDマウス皮下にこの癌細胞を3万個ずつ注射して移植し、16週まで腫瘍増殖を観察し、腫瘍形成のあるマーカーをその細胞の癌幹細胞マーカーの候補とした。さらに表面マーカー陽性でソーティングした胃癌細胞株を5FU等の抗癌剤存在下で培養しMTTアッセイで生存細胞数を計測し、表面マーカー毎に各細胞株での生存率が有意に高いものをそれぞれの細胞株の癌幹細胞マーカーと同定した。現在、胃癌幹細胞マーカーに対するsiRNAオリゴDNAを設計してタカラバイオ社製のsiRNA発現型プラスミドpBAsi-hU6に挿入して胃癌幹細胞抑制型プラスミドを構築中である。

Research Products

• [Journal Article] The impact of abdominal shape index of patients on laparoscopy-assisted distal gastrectomy for early gastric cancer (2012)
  • Author(s): Ojima T, Iwahashi M, Nakamori M, et al.
  • Journal Title: Langenbecks Arch Surg Volume: 397 Issue: 3 Pages: 437-45
  • DOI: 10.1007/s00423-011-0883-7
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 術前EUS微量腹水陽性による腹膜播種診断における患者因子による影響の検討 (2011)
  • Author(s): 辻俊明
  • Organizer: 第73回日本臨床外科学会総会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2011-11-17
• [Presentation] 胃癌腹膜播種高危険群に対する治療戦略とその成績 (2011)
  • Author(s): 辻俊明
  • Organizer: 第49回日本癌治療学会学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2011-10-27
• [Presentation] 腹腔鏡による胃癌腹膜播種診断の適応の妥当性の検討 (2011)
  • Author(s): 辻俊明
  • Organizer: 第66回日本消化器科学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2011-07-14