細胞質持続発現型RNAベクターを用いた高効率かつ安全な分化誘導方法の確立

Research Project

Project/Area Number	23890026
Research Category	Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	General medical chemistry
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	西村健筑波大学, 医学医療系, 助教 (80500610)
Project Period (FY)	2011-08-24 – 2013-03-31
Project Status	Declined (Fiscal Year 2012)
Budget Amount *help	¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000) Fiscal Year 2012: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000) Fiscal Year 2011: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Keywords	持続発現型ベクター / 神経分化 / 未分化細胞除去
Research Abstract	マウスiPS細胞から神経細胞を分化させる系において、残存未分化細胞を除去するために、細胞質持続発現型RNAベクターを用いる系の構築を行った。まず、ブラストサイジン耐性遺伝子とP450遺伝子を同時に発現する細胞質持続発現型RNAベクターを用意し、それをマウスiPS細胞に感染させた。ベクター感染細胞を選択するためにブラストサイジンを培地に加えてpositive選択を行ったところ、ベクター非感染細胞の除去に成功した。また、ベクター感染によるマウスiPS細胞の生育阻害等は観察されなかった。このようにして用意した、すべての細胞にベクターが感染している細胞群に対して、次に、P450遺伝子の基質であるcyclophosphamideを培地に加え、negative選択の可否を検討した。その結果、数日ですべての細胞が死滅したことから、1つの細胞質持続発現型RNAベクターを用いて、positive-negative選択が可能であることを明らかにした。また、マウスiPS細胞を神経分化させる系の立ち上げも並行して行った。マウスiPS細胞から胚葉体を形成させ、ゼラチンコート上でレチノイン酸によって神経細胞への分化を誘導した。その結果、胚葉体形成から約2週間ほどすると、神経細胞様の細胞が観察されるようになったことから、このような系を用いて、マウスiPS細胞から神経細胞の誘導を行うことが出来ることを明らかにした。現在、上記のpositive-negative選択細胞質持続発現型RNAベクターを感染させたマウスiPS細胞を神経細胞に分化させた時の、分化能への影響、感染持続性への影響、未分化細胞除去の可否、等を検討している。