| Project/Area Number |
23K05395
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 40040:Aquatic life science-related
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
長富 潔 長崎大学, 総合生産科学研究科(水産学系), 教授 (40253702)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平坂 勝也 長崎大学, 海洋未来イノベーション機構, 教授 (70432747)
吉田 朝美 長崎大学, 総合生産科学研究科(水産学系), 准教授 (80589870)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 活性酸素生成系 / 酸化ストレス / プログラム細胞死 / マクロファージ系細胞株 / プロモーター / 転写制御 / Edwardsiella tarda / 宿主免疫回避 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究では エドワジエラ症の原因菌Edwardsiella tardaの生菌がマクロファージに貪食された後の宿主応答に着目し、E.tarda 感染に伴うマクロファージの酸化ストレス応答、活性酸素生成系の食細胞 NADPH オキシダーゼのタンパク質間相互作用、iNOSの転写制御、並びに感染初期のプログラム細胞死の誘導制御を明らかにすることにより、E.tarda 強毒株による宿主免疫回避の分子機構を解明する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では Edwardsiella tarda ( E. tarda ) 生菌がマクロファージに貪食された後の宿主応答に着目し、E. tarda 感染に伴うマクロファージの酸化ストレス応答、活性酸素生成系の食細胞 NADPH オキシダーゼのタンパク質間相互作用、誘導型 NO 合成酵素 ( iNOS ) の転写制御、並びに感染初期のプログラム細胞死の誘導制御を明らかにすることを目的とした。
本年度は、マウスマクロファージ系細胞株 RAW264.7 にE. tarda 強毒株、もしくは弱毒株を貪食させた後、経時的に生菌数測定及びギムザ染色による顕微鏡観察を行った。その結果、E. tarda強毒株はRAW264.7細胞内で殺菌されず、細胞内で増殖したが、弱毒株は次第に減少し最終的に死滅したので、RAW264.7細胞はE. tarda感染のin vitroモデル系として有用であった。そこでE. tarda強毒株、もしくは弱毒株暴露に伴うRAW264.7細胞のプログラム細胞死を検証した結果、弱毒株ではDNA断片化とcaspase-3の活性化が見られ、アポトーシスが起きていたが、強毒株ではアポトーシスの兆候は見られなかった。また、IL-1β mRNA発現量は感染3時間後にE. tarda強毒株、弱毒株感染区、及びLPS処理区の全細胞でほぼ同レベルであったが、IL-1βの分泌量はE. tarda強毒株感染区のみ顕著に高かった。IL-1βの分泌とパイロトーシスと呼ばれる細胞膜の崩壊を伴うプログラム細胞死は協調して起こると言われている。以上の結果より、IL-1β分泌に伴うパイロトーシスの誘導は、E. tarda感染の病原性と深く関わる特異的なマクロファージの応答である可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
食細胞 NADPH オキシダーゼのタンパク質間相互作用の検証はやや遅れている状況ではあるが、E. tarda感染初期の細胞内増殖能とプログラム細胞死の誘導制御の解析で得られた新知見については、国際学術雑誌Infection and Immunityに現在投稿中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
E. tarda 感染初期におけるマクロファージ系細胞のプログラム細胞死の誘導制御の詳細な解析を行う。更には、E. tarda 感染に伴う酸化ストレス応答とプログラム細胞死との関連性についても検証を進めていく。
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