| Project/Area Number |
23K05659
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 43020:Structural biochemistry-related
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| Research Institution | Sojo University |
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Principal Investigator |
高橋 大輔 崇城大学, 薬学部, 准教授 (70791523)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
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| Keywords | クライオ電顕 / 単粒子解析 / DGK / 脂質代謝酵素 / ジアシルグリセロールキナーゼ / 構造解析 / クライオ電顕単粒子解析 / DGKα |
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| Outline of Research at the Start |
脂質メッセンジャーであるDGの代謝を担うDGKαは，がん細胞の増殖を促すが，逆にT細胞では非応答状態を誘導するという生物・医学的に重要な機能をもつ．このため，DGKαは新規がん免疫創薬の標的として注目されているが，構造生物学的理解は極めて乏しい．本研究では，申請者が先駆的に進めてきたDGKαの構造研究を発展させ，触媒ドメインを含めたDGKαの全長の立体構造を包括的に明らかにする．特にCa2+結合によるDGKαの分子内活性化機構，チロシンキナーゼ FAKとの相互作用の構造基盤を明らかにする．得られる情報は，阻害剤開発のための基盤情報となる他，進展が乏しい脂質代謝酵素の構造生物学理解の一助となる.
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| Outline of Annual Research Achievements |
構造・構造変化解析のための全長DGKα試料のデザインと調製を行った。DGKαとGFPの融合蛋白質（eGFP-DGKα）を
昆虫細胞発現系を用いて大量発現し，クロマトグラフィーにより精製した。さらに抗DGKα抗体Fab断片との複合体、また抗GFP抗体ナノボディとの３者複合体をゲル濾過クロマトグラフィーにより単一のピークとして分離することに成功した。得られた複合体の電顕観察を行い、画像データを取得した。現在データ解析を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
電子顕微鏡観察のための試料調製は進んだが、その後の観察・データ解析に時間を要しているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
クライオ電子顕微鏡のデータ解析を鋭意進める。同時に、小角散乱実験を行い、DGK全長の構造変化解析を進めていく。
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