| Project/Area Number |
23K06342
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Section | 一般 |
|---|
| Review Section |
Basic Section 48020:Physiology-related
|
|---|
| Research Institution | Hirosaki University |
|---|
Principal Investigator |
村上 学 弘前大学, 医学研究科, 教授 (80302090)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
富田 泰史 弘前大学, 医学研究科, 教授 (00431437)
三好 一郎 東北大学, 医学系研究科, 教授 (10183972)
竹島 浩 京都大学, 薬学研究科, 教授 (70212024)
長友 克広 弘前大学, 医学研究科, 助教 (30542568)
丹羽 康貴 弘前大学, 医学研究科, 准教授 (40590071)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
|
| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
|
|---|
| Keywords | カルシウム / イオン / マウス / 腎臓 / 多発性嚢胞腎 / TRPP |
|---|
| Outline of Research at the Start |
多発性嚢胞腎は進行性の多発性嚢胞腎を特徴とするが, 高血圧, 交感神経トーヌスの亢進, 内皮細胞機能異常に伴う血管抵抗上昇など, 心血管系の合併症が死因となる場合が多い. PKDモデル動物における cAMP 増加が知られるが, PKD分子と心筋内cAMPとの関係は, 理解が進んでいない. そこで, PKD分子中, 心筋に発現が多いTRPP3のチャネルポアを欠くdominant-negative 遺伝子を構築し, 過剰発現マウスを作製する. このマウスを用いて交感神経刺激下, 心筋の収縮力や活動電位を評価し, TRPP3の心筋における役割を解明する.
|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、多発性嚢胞腎(PKD)関連分子であるTRPP3チャネルの“心筋における交感神経情報伝達系(cAMP系)への関与”を解明することである。PKDは進行性の多発性嚢胞腎を特徴とするが、高血圧、交感神経トーヌスの亢進、内皮細胞機能異常に伴う血管抵抗上昇など、心血管系の合併症が死因となる場合が多い。
TRPP3のチャネルポアを欠くdominant-negative 遺伝子を構築した。作製した変異遺伝子（dnTRPP3遺伝子）をマウス雄性前核に注入し、dnTRPP3過剰発現マウスを作製した。このトランスジェニックマウスは２系統（A, Bライン）作製したが、組み込まれた遺伝子数が多い系統を用いて循環器系の解析を行った。心筋における変異遺伝子の過剰発現(RT-PCR)を確認後、タンパク分子として変異TRPP3過剰発現していることをWestern法で確認した。
このマウス系列を用いて交感神経刺激下、心筋の収縮力や活動電位を評価し、TRPP3の心筋における役割を解析した。
心筋における遺伝子発現を解析したところ、dnTRPP3過剰発現マウスの心筋において交感神経β1およびβ2受容体の遺伝子発現が増加していた。心筋における遺伝子発現を解析したところ、dnTRPP3過剰発現マウスの心筋において交感神経β1およびβ2受容体の遺伝子発現が増加していた。dnTRPP3過剰発現マウスの心電図において、 上室性期外収縮が起こることを見出した。他に、陽イオンチャネルの一種類である電位依存性カルシウムチャネルサブユニット間の新規結合部位を自らが開発した手法を用いて同定した(Murakami et al., Sci.Rep. 2023)。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
トランスジェニックマウスを２系統（A, Bライン）作製する事に成功し、心筋における変異遺伝子の過剰発現(RT-PCR)を確認後、タンパク分子として変異TRPP3過剰発現していることをWestern法で確認した。心筋における遺伝子発現を解析したところ、dnTRPP3過剰発現マウスの心筋において交感神経β1およびβ2受容体の遺伝子発現が増加していた。dnTRPP3過剰発現マウスの心電図において、 上室性期外収縮が起こることを見出した。研究報告もいくつか論文発表しており順調である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
トランスジェニックマウス作製に成功し、変異遺伝子過剰発現マウスの解析も順調に進んでいる。今後、さらに循環器系の解析を続行する。
|
