| Project/Area Number |
23K06436
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49020:Human pathology-related
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
桑原 一彦 近畿大学, 大学病院, 講師 (10263469)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
酒井 康弘 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (20754394)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 非遺伝性散発性乳癌 / ヒストンアセチル化酵素 |
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| Outline of Research at the Start |
乳癌は腫瘍生物学的特性によって薬剤感受性や予後が異なり、この分子機構の解明は今後増加する乳癌の新たな治療戦略となる。これまでGANPの機能不全による「転写共役型DNA傷害」と、乳癌を含む種々の腫瘍の発症や悪性進展の関係を明らかにしてきた。ヒトganp遺伝子のヒストンアセチル化酵素（HAT）ドメインがヒト乳癌で欠失（ΔHAT）していることを証明し、ΔHATが乳癌の細胞増殖や局所浸潤にもたらす影響を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和5年度はa) 乳癌検体と用いたganp遺伝子の異常スプライシングの検出、b) HATドメイン内外を特異的に認識するモノクローナル抗体の樹立、を主な研究内容とした。
a) すでにヒト乳癌細胞株の一部でganp遺伝子の異常スプライシングを生じていることを確認し、HATドメインの活性に影響を及ぼしていることが示唆されている。本年はヒト乳癌検体でも同様にスプライシングの異常が生じているかを検討した。臨床検体は名古屋市立大学乳腺外科の遠山竜也教授から供与頂き、まず30検体を用いてHATドメインのみをシークエンスした。その結果、25%程度のサンプルで異常スプライシングを検出した。手術摘出検体のためRNAの品質がやや悪いと考えられたが、PCRの増幅効率がやや悪いという問題点があるものの、シークエンス解析によりHATドメインに影響することが判明した。
b) a)と関係するが、非遺伝性散発性乳癌の発症に関して、GANPのHATドメインが関与する可能性があり、内在性のHAT活性の異常が重要と考えられる。GANPのHATドメインを特異的に認識するモノクローナル抗体の樹立を目指すことにした。ホルマリン固定パラフィン包埋切片での免疫染色可能な抗体が必要であり、我々が以前より高親和性モノクローナル抗体樹立の目的で免疫動物として用いてきたIg-ganpTgマウスを使用することが望ましいと考えた。現在所属する近畿大学での遺伝子組組換え動物の承認に時間を要し、前任地からのマウスの移動に時間がかかり、さらに現在の飼育環境の問題も一部あったため、免疫操作を行うまでには至らなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
令和5年度の研究内容として予定した項目のうち、今回の研究の根幹をなす部分である遺伝子改変マウスを使用してのモノクローナル抗体作製の部分が遅延している。その理由として、遺伝子改変マウスの他施設からの導入に時間がかかったこと、導入後のマウスの維持が予想以上に困難で、特にgenotypingに関してこれまでの条件で明瞭なバンドが検出できないという問題が起こり、免疫操作をするための十分なマウス数の確保ができなかったことがあげられる。その他の実験計画に関しては、概ね順調に進んでいる。また令和5年度の計画には入れていなかったが、ヒトΔHAT乳癌細胞株の樹立を開始し、途中経過では有望なクローンが得られている。研究計画に関しては総合的に考えて、やや遅れている、という判断をした。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究実績の概要で示したa)に関してはさらに解析数を増やして明瞭な結論が得られるようにしたい。これまではRT-PCRによりHATドメインを増幅してシークエンスをしたが、効率を考えるとRNAシークエンスを考慮するのが望ましい。
b)に関して、マウスの繁殖とgenotypingの改善が行われてきたため、マウスへの免疫操作は行えると考えており、令和6年度には有望なクローンの樹立を目指したい。
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