| Project/Area Number |
23K06452
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49020:Human pathology-related
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
康 徳東 昭和大学, 医学部, 講師 (00571952)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
本田 一穂 昭和大学, 医学部, 教授 (10256505)
板部 洋之 昭和大学, 薬学部, 教授 (30203079)
高木 孝士 昭和大学, 大学共同利用機関等の部局等, 准教授 (10774820)
澤 智華 昭和大学, 医学部, 講師 (80422541)
川西 邦夫 昭和大学, 医学部, 准教授 (00578750)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2024: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
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| Keywords | LCMS/MS / 三次元構築 / 近位尿細管上皮細胞 / 抗刷子縁抗体 / 自己免疫疾患 / LCMS/MS分析 / Megalin / ミトコンドリア / 質量分析法 / 近位尿細管傷害 / ミトコンドリア異常 / 尿細管間質炎 / 抗刷子縁抗体病 |
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| Outline of Research at the Start |
近年注目されている抗刷子縁抗体病は急性腎障害を惹き起こし、末期腎不全へ移行する自己免疫疾患で、診断のためのバイオマーカーと治療の確立が求められている。本研究ではHeymann腎炎ラットモデルを用い、抗刷子縁自己抗体の負荷によるPTEC傷害を解析し、Mitの形態学的異常とプロテオミクス・バイオマーカーとの関連性を明らかにする。得られた知見は細胞膜構造である刷子縁と細胞内共生したMitとを結ぶ新たな細胞内連関経路を明らかにし、自己抗体や病原体などの細胞膜に作用する種々な病因がMit傷害を誘発し、PTEC傷害を増悪させる新たな腎疾患の進展機構の提唱に繋がると期待される。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではHeymann腎炎モデルラットを併用し、光顕、電顕および質量分析法を用いて、近位尿細管上皮細胞傷害および尿細管間質炎の病理学的解析を実施した。動物数も計画内で適切に運用され、有意義な関連因子の発現が確認された。エポン包埋標本から連続超薄切片を作成し、近位尿細管上皮細胞内小器官の三次元観察を準備中である。LC-MS/MSによる網羅的タンパク質解析と三次元電顕観察を組み合わせ、形態変化とタンパク因子の関連性を検討した結果、病態解明に資する知見が得られつつある。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
現在、本研究におけるデータ解析は、他施設との共同研究体制のもとで進めており、プロテオームデータについてはAIを用いた網羅的解析を含む高度な処理工程を経ている。これに加えて、得られた候補タンパク質の組織局在や発現動態を明らかにするために免疫染色による検証作業も進行中であり、抗体の選定・最適化や染色条件の調整に一定の時間を要している。また、共同研究先とのデータ共有・レビューの調整、さらに知的財産の保護に関わる配慮も必要とされており、一部結果の解析・公表時期に慎重な判断を要する状況となっている。以上の理由により、全体的な解析スケジュールに若干の遅れが生じている。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在進行中のプロテオーム解析および免疫染色による検証に加え、今後は網羅的トランスクリプトーム解析（RNA-seq）を展開し、転写レベルにおける分子変化の包括的理解を図る予定である。すでにRNA-seq解析は外部機関との連携により開始されており、AI支援による解析プロセスを導入しながら、候補遺伝子の絞り込みと病態との関連性の明確化を進めている。また、近位尿細管上皮細胞の構造的変化に関する理解をさらに深めるため、電子顕微鏡を用いた三次元形態観察の最適化にも取り組んでおり、連続切片からの立体再構築や小器官レベルでの定量評価を目指している。これらの解析手法を組み合わせることで、形態・タンパク質・遺伝子レベルを統合した多階層的病態解明を実現し、将来的なバイオマーカーや治療標的の同定に関する研究の推進を期待する。現時点で、各種の検証を進める上で特段の問題や支障は生じていないと考えられる。
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