CCL1-CCR8経路を介した腫瘍内Treg制御による治療法の探索

• Project/Area Number: 23K06649
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 50010:Tumor biology-related
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 中井 慈人 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (40912027)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西塔 拓郎 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (20646468) ; 和田 尚 大阪大学, 大学院医学系研究科, 特任教授(常勤) (70243459)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2023)
• Budget Amount: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000); Fiscal Year 2025: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2024: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2023: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
• Keywords: CCL1発現細胞 / CCR8発現細胞 / ISH法 / 制御性T細胞 / 腫瘍免疫環境 / CCR8 / CCL1

Outline of Research at the Start

Treg制御は抗腫瘍免疫増強の鍵になるが、現在Treg制御の治療薬は確立されていない。我々はCCR8が腫瘍内の活性型Tregにのみ発現することを明らかにし、Treg制御を期待した抗CCR8抗体薬の治験が開始されてた。今回CCR8のリガンドであるCCL1に注目した。CCL1はCCR8陽性Tregを腫瘍へ誘導するとされるが、悪性腫瘍におけるCCL1発現細胞や発現頻度は明らかでない。本研究では悪性腫瘍においてCCL1発現を解析しCCL1によるCCR8陽性Tregの腫瘍誘導メカニズムを明らかにすることで、抗CCR8抗体薬の治療対象癌腫を明らかにし、さらにはCCL1制御による新規治療法の開発を模索する。

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、悪性腫瘍におけるCCL1発現を解析し、CCL1によるCCR8陽性Tregの腫瘍誘導メカニズムを明らかにすることである。令和5年度の研究計画としては、切除悪性腫瘍サンプルを用いたCCL1・CCR8発現細胞を評価することであり、種々のヒト悪性腫瘍（食道癌・胃癌・大腸癌・卵巣癌・膀胱癌・腎癌）におけるCCR8とCCL1発現細胞の位置・数の関係を評価し、CCR8・CCL1が豊富に発現する癌腫を明らかにする計画であった。方法として、まずは、各悪性腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、In situ hybridization（ISH法）を実施した。大腸癌14例、食道癌6例、胃癌7例、卵巣癌6例を対象とし、カウント方法は、CCL1は腫瘍部（全視野）でCCL1陽性細胞数をカウントし、HE染色にて腫瘍面積を測定し、腫瘍単位面積あたりのCCL1陽性細胞数を評価した。また、CCR8は200倍率の視野で、hot spot 5視野を選択し、CCR8陽性細胞数をカウントし、CCR8陽性細胞数を評価した。すると、CCL1発現細胞数とCCR8発現細胞数は正の相関を認めた（相関係数；0.6768）。また、同時に各悪性腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、免疫染色法（IHC法）を用いて腫瘍組織内でのCCR8・CCL1の単位面積当たりの発現細胞数を評価する計画をしている。現状、CCL1について条件設定が終了し、PreliminaryなIHC法の結果では、大腸癌の間質において、免疫細胞の細胞質で、CCL1が染色された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

計画通りに進行している。

Strategy for Future Research Activity

今年度、大腸癌、食道癌、胃癌、卵巣癌の腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、In situ hybridization（ISH法）を実施したことで、CCL1発現細胞数とCCR8発現細胞数は正の相関を認めた（相関係数；0.6768）。しかしながら、CCL1を発現する細胞を同定することができなかったために、Flowcytometry（FACS）解析においてmRNA発現が検出できるPrime Flow法を用いて、解析していく。