| Project/Area Number |
23K07464
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53010:Gastroenterology-related
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
阿部 和道 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (30468128)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 敦史 福島県立医科大学, 医学部, 准教授 (40404868)
大平 弘正 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (90274951)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2024: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2023: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
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| Keywords | 自己免疫性肝炎 / 間葉系幹細胞 / mir-557 / エクソソーム / シングルセル解析 |
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| Outline of Research at the Start |
AIHは原因不明の難治性自己免疫疾患であり, 病態解明ならびに治療法開発が急務となっている. 近年, 細胞から体液中に分泌されるエクソソーム由来マイクロRNA（miR）の免疫応答を標的とした治療法の開発が検討されている.申請者は, 網羅的アレイ結果からAIHの疾患特異的なエクソソーム由来miRを同定し, その機能として炎症性免疫応答を誘導し, AIHの再燃に関与することを報告した. 本研究では, miRを豊富に含むエクソソームをAIHマウスモデルに投与して肝炎を増悪・軽減させ, シングルセル遺伝子発現解析を用いてAIHの免疫病態を解明し, この疾患に対する新規治療法を確立することを目的とする.
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. メスC57BL/6マウスの肝臓から精製したS-100抗原タンパク（2.5mg/200μL）とcomplete Freund’s adjuvant（CFA, 200μL）をメスC57BL/6マウスに1回/週（day0, day7）に皮下投与し, 投与4週間後に慢性肝炎を発症しAIHマウスモデルとなる.2. ヒト間葉系幹細胞（PromoCell,Heidelberg, Germany）にmiR-557mimicをトランスへクションし, 培養上清のエクソソームを回収率の高い抽出キット（exoRNeasy Serum Plasma Kits ：QIAGEN）を用いて抽出し,miR-557が豊富な間葉系幹細胞由来エクソソームを作成する.3. マウス骨髄由来のマクロファージをmiR-557含有エクソソームと共培養し, 48時間後にマクロファージを採取し,炎症性または抗炎症性サイトカイン, ケモカインのmRNA発現を評価する. 4.以下の2つのグループに分けて,AIHマウスモデルから肝臓を摘出して, 肝炎発症や重症化, 軽減の有無を確認する. また,血清中のALTやIgG,抗核抗体をELISAで測定する. （a）AIHマウスモデル群, （b）AIHマウスモデルのmiR-557を含有するエクソソーム投与群. 5. エクソソームがAIHマウスモデルの肝臓に及ぼす影響を確認するために, AIHマウスモデルに（a）miR-557含有のエクソソーム（5μg）投与48時間後に肝臓を採取し, 肝臓の免疫細胞（特にマクロファージやTfh細胞）のシングルセル遺伝子発現解析を行う. さらにGO解析を行なって機能評価を行う.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
自己免疫性肝炎マウスモデルの作成とエクソソーム作成の準備に時間がかかっているため
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| Strategy for Future Research Activity |
自己免疫性肝炎マウスモデルの作成が進んできたので、今後、mir-557含有のエクソソームを作成し、細胞実験やマウス実験への応用実験を進めていく
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