自己免疫性肺胞蛋白症の末梢血B細胞シングルセル解析による病態解明と新規治療開発

Research Project

Project/Area Number	23K07625
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	二見真史大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (50975191)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	武田吉人大阪大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (40452388) 井上義一独立行政法人国立病院機構近畿中央呼吸器センター, 臨床研究センター, 客員研究員 (90240895)
Project Period (FY)	2023-04-01 – 2026-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000) Fiscal Year 2025: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000) Fiscal Year 2024: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000) Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Keywords	自己免疫性肺胞蛋白症 / 病原性抗体 / 抗GM-CSF抗体 / シングルセルレパトア解析 / 臍帯血
Outline of Research at the Start	本研究では、GM-CSF抗体の病原性の評価を行うため、ヒト臍帯血を用いてヒト化マウスを作成する。そのマウスに対してリコンビナントモノクローナル抗体を投与し、Affinityやエピトープによる違いを評価していく。
Outline of Annual Research Achievements	自己免疫性肺胞蛋白症の患者から採取した血液中に含まれる、GM-CSF反応性B細胞から、抗GM-CSFモノクローナル抗体をクローニングし、抗体作成を行った。その抗体のGM-CSFとの結合力（Affinity）やエピトープを評価した。レパトア情報をもとに、今まで評価できていなかった、経時的なサンプルのうち重要と思われる抗体の評価を2023年度には行った。自己免疫性肺胞蛋白症は、希少疾患であるがゆえ、フォローアップしている経時的なサンプルの取得が困難であるが、本研究ではそのようなサンプルの取得も一部の患者から行うことが可能であった。また、マウスモデルの確立を目指し、ヒト由来の幹細胞をマウスに移植し、定着することを確認した。定着したマウスに対して、患者由来のGM-CSF抗体を投与を継続し、血中のバイオマーカーを評価しながら、病原性の出現時期を判断し、最終的に肺胞洗浄を行うことによって、GM-CSF抗体のin vivoでの病原性の評価を行った。肺胞洗浄液中に含まれる蛋白濃度を評価するとともに、病理組織学的な評価も行って、病原性を評価した。本研究の途中経過（in vitroでの病原性の評価やクライオ電顕によるエピトープマッピング）については、2023年4月に開催された、日本呼吸器学会学術講演会において、研究成果の報告を行い、自己免疫性肺胞蛋白症に関する国内の研究者とディスカッションを行い、考察を深めた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 本研究においては、in vivoのマウスモデルの構築についても予定通り進めることができており、概ね順調に進んでいると考える。
Strategy for Future Research Activity	in vivoのデータの整理を行い、現時点での経過について論文での報告を行うことを念頭に準備を進めていく。