| Project/Area Number |
23K07791
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53050:Dermatology-related
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
国本 佳代 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (10438278)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神人 正寿 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (60401048)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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| Keywords | 中條-西村症候群 / プロテアソーム / microRNA / 老化 |
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| Outline of Research at the Start |
中條‐西村症候群（NNS）はβ5iの変異によるプロテアソーム機能不全のために不要蛋白質が蓄積し生じる自己炎症性疾患である。本疾患にはheterogeneityが存在し遺伝子変異だけでは病態の全てを解明できておらず、なんらかの環境因子が関与している可能性がある。
そこで本研究では、non-coding RNAの一つで遺伝子の翻訳調節に関与し、環境因子として機能しうることが示唆されているmicroRNAに着目し、そのNNSの病態への関与、血清中濃度の病勢マーカーとしての有用性、そしてmicroRNAによるマウス自己炎症の誘導の3点を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
者末梢血単核細胞あるいは皮膚パラフィン組織(n=5以上)からmiRNeasy Kit (Qiagen)を用いてmicroRNAを抽出した。正常血液および皮膚をコントロールとして使用した。PSMB8発現に関係しうる3つのmicroRNA(miR-125b-5p, -125a-5p, -4319)の発現が患者血液や皮膚でコントロールに比べて変化しているかを調べるため、Mir-X miRNA First Strand Synthesis and SYBR qRT-PCR Kit (Takara)を用いてcDNA化を行い、今後は得られたcDNAを鋳型としてquantitative real-time PCRを行っていく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
サンプルのcDNA化は終えているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
得られたcDNAを鋳型としてquantitative real-time PCRを行う。各microRNAに対応するprimerの配列はmiRBase (http://www.mirbase.org)より取得する。データの解析はThermal Cycler Dice Real Time System ver2.10B (Takara)上で行う。目的とするmicroRNAの相対濃度をstandard curve methodを用いて計算し、同一サンプルのU6濃度によって補正する。上記の3microRNAに発現変化がない場合、PCRアレイ (Qiagen) によりさらに多数のmicroRNA発現を調べ、特異的な発現異常を示すmicroRNAを同定するよう努める。
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