| Project/Area Number |
23K08434
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55060:Emergency medicine-related
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
中嶋 康文 近畿大学, 医学部, 教授 (70326239)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
秋山 浩一 近畿大学, 医学部, 講師 (70898890)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥390,000 (Direct Cost: ¥300,000、Indirect Cost: ¥90,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
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| Keywords | 遺伝子治療 / microRNA / トランスクリプトーム / 敗血症 |
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| Outline of Research at the Start |
パイロトーシスは、細胞内感染時に誘導されるプログラムされたネクローシス性細胞死の一種で通常、単球、マクロファージおよび樹状細胞などの自然免疫系の細胞で誘導されるが、今回の我々の予備実験で、好中球や血小板にもパイロトーシスが起き、敗血症病態に寄与することが示唆された。
１つのmiRNAが、複数の遺伝子発現に関与しているため今まで１つのタンパク質の発現変化で説明が出来なかったCommon Diseaseの病態解明、バイオマーカー、治療薬としてmiRNA解析は期待できる。本研究では敗血症病態における血球減少の原因となるmiRNAとそのターゲットなるmRNA、タンパク質の解明が期待される。
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らは、敗血症に伴う病態の中で、科研の申請書に記載したように、未だその機序が不明な血球減少の細胞内情報伝達系に注目している。
我々は予備実験において、非敗血症患者との比較で重症敗血症病態の白血球減少や血小板減少時に各々の細胞のシグナル伝達系において、インフラマソーム関連や細胞接着関連遺伝子の関与や、血球数減少に伴い細胞周期も亢進していることが示唆されたので、これらの細胞内情報伝達系について注目して、追加実験として定量的PCRの実験を行い、統計学的にも発現に有意に差異があることを確認した。また、タンパク質レベルの発現においては、ＥＬＩＳＡまたは、ウエスタンブロッティング法を用いて、統計学的にも発現に有意に差異があることを確認した。
次に、血球数が減少した患者群と、しなかった群で、同時にmicroRNA（miRNA）の発現解析を、miR TarBase というデータベースで過去の研究報告で、ターゲットなりうるｍRNAへの結合が証明されているmiRNAを選別した後、その定量的発現を定量的PCRを施行して血球減少群で発現が減少しているのを確認した。
今後の方針としては、パスウェイ解析ソフトウェア を用いてmiRNA-mRNAの相互作用を解析により、どのようなmiRNAの組み合わせが、最も血球減少に影響を及ぼすのかを確認し、血球及び血小板減少の要因となる遺伝子、蛋白質を同定し、培養細胞実験および動物実験で再現する系を確立すれば、将来の遺伝子治療に発展できる可能性があると考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
未だにコロナ禍の影響のせいか、必要となる実験消耗品の受注や、実験の外注での検査が遅れて、予想外に実験計画が遅延している。
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| Strategy for Future Research Activity |
２０２４年度に行う予定であった実験計画の遂行と、２０２４年度に依頼した外注実験の結果を解析し、２０２５年度は今後の研究の方針を立てる予定である。
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