The role of Taf7l and Fscn1 in peripheral nerve regeneration

Research Project

Project/Area Number	23K08674
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 56020:Orthopedics-related
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	大村威夫浜松医科大学, 医学部, 特任准教授 (70402295)
Project Period (FY)	2023-04-01 – 2026-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000) Fiscal Year 2025: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000) Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Keywords	Taf7l / Fscn1 / 末梢神経再生 / 末梢神経 / 再生
Outline of Research at the Start	神経損傷時におけるfscn1, taf7lの遺伝子、蛋白の局在、発現を定量的に行い、またfscn1, taf7lに対するshRNA（ウイルスベクター）を用い、DRG単離培養細胞でノックダウンを行い、機能喪失実験行う。さらにfscn1, taf7lに対するover expressionのウイルスベクターを用い、機能獲得実験を行い、in-vivo modelにおいても検討を行う。
Outline of Annual Research Achievements	【研究の目的】近交系マウスの末梢神経環境下での軸索伸長と遺伝子発現のスクリーニングを行った所、末梢神経環境下において軸索伸長と最も強い相関を示した遺伝子はTATA-box binding protein associated factor 7 like (Taf7l)であり、次いで強い相関を示した遺伝子はfascin actin-bundling protein 1(Fscn1)であることが、判明した。Taf7lの転写産物はTATA結合タンパク質関連因子であり、大変興味深いことにFscn1の転写因子であることが知られており、これらは同じpathwayにある可能性がある。本研究ではこれらの遺伝子と、、末梢神経再生との関係を明らかにすることである。【結果】両遺伝子に対して機能喪失実験、獲得実験を行った。C57BL/6を用いて、後根神経の単離培養細胞を行い、レンチウイルスベクターおよび阻害剤を用いた。その結果、Taf7l shRNAを作成し機能喪失実験を行った所、control shRNAとの比較で軸索伸長は27％有意に低下した。またtaf7l GFP発現レンチウイルスベクターを用い、軸索機能獲得実験を行った所、over-expression群で軸索伸長がコントロール群と比較し25％有意に長く、軸索発芽率も有意に高値であった。Fscn1阻害剤を用いて機能喪失実験を行った所、阻害剤の濃度依存的に有意な軸索伸長の低下が見らた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 当初予定していたTaf7lに関する機能喪失、獲得実験が行え、Fscn1にたいしても機能喪失実験が実施できた。
Strategy for Future Research Activity	本年度はFscn1のGFP発現レンチウイルスベクターを作成し機能獲得実験を計画している。